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目的:本研究基于中医理论中“肝主筋,肾主骨,脾主肌肉”的特点,选取需行腰椎开放手术治疗的肝肾亏虚下腰痛患者30例及非肝肾亏虚下腰痛患者30例,术中取腰椎小关节、黄韧带、椎旁肌组织。临床辨证结合现代技术,通过观察人体腰椎组织形态病理学改变以及采用透射电镜技术进一步分析其超微结构,探讨人体长期处于肝肾亏虚状态下,对比不处于肝肾亏虚或较少处于肝肾亏虚状态下腰椎小关节、黄韧带、椎旁肌组织的变化及意义。旨在于从病理学及超微组织形态学角度探讨肝肾亏虚影响腰椎退行性病变的机制,本课题分为以下三个部分:1.肝肾亏虚下腰痛老年人腰椎小关节软骨超微结构的观察2.肝肾亏虚下腰痛老年人腰椎黄韧带超微结构的观察3.肝肾亏虚下腰痛老年人腰椎椎旁肌超微结构的观察第一部分方法:1.选取需行腰椎开放手术治疗的肝肾亏虚下腰痛患者及非肝肾亏虚下腰痛患者各30例,术中取腰椎小关节组织;2.制作腰椎小关节组织切片HE染色观察;3.透射电镜观察两组腰椎小关节软骨标本。结果:1.光镜下,非肝肾亏虚组腰椎小关节关节软骨表面平滑连续,软骨层较厚,细胞数目较多,形态规则,排列整齐,层次分明,“潮线”清晰;而肝肾亏虚组关节软骨表面损伤,细胞分层结构不清。在退变早期软骨细胞数量稍增多但簇集成团,为体积较大的同源细胞群,在退变后期软骨细胞死亡,可见空泡的软骨陷窝,软骨细胞数量明显减少,分布不均匀,排列不规整,软骨层变薄。“潮线”扭曲不规则甚至消失,在钙化层中可见骨小梁,软骨下骨重建、增生硬化。实验组软骨Mankin’s病理学评分明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2.电镜下,非肝肾亏虚组正常腰椎小关节软骨细胞形态正常,胞核染色质均匀分布,细胞质内细胞器丰富;肝肾亏虚老年人腰椎小关节软骨内软骨细胞收缩变小,细胞核形态不规则,染色质固缩,细胞器数量较少,胞质内大量空泡;胞质内出现脂肪滴,软骨基质中纤维稀少紊乱,部分区域有溶解现象。第二部分方法:1.选取需行腰椎开放手术治疗的肝肾亏虚下腰痛患者及非肝肾亏虚下腰痛患者各30例,术中取腰椎黄韧带组织;2.制作腰椎黄韧带组织切片HE染色观察;3.透射电镜观察两组腰椎黄韧带标本。结果:1.光镜下,非肝肾亏虚组黄韧带组织内包含大量粗大的弹力纤维,胶原纤维及细胞外基质占比较少,分布有少量纤维细胞与成纤维细胞,贴附纤维生长,细胞形态大致正常。肝肾亏虚组黄韧带中弹力纤维不同程度减少,变细甚至断裂消失,走向紊乱;胶原纤维成分及细胞外基质成分明显增多,黄韧带发生纤维化。2.电镜下,非肝肾亏虚组腰椎黄韧带组织内以弹力纤维为主,少量胶原纤维,黄韧带内细胞数量少,多为长梭形的纤维细胞,细胞体积较小,核小、胞浆少,细胞器数量少,细胞核染色质均匀分布;肝肾亏虚组黄韧带组织内弹力纤维减少,胶原纤维成分增多,基质中可见成纤维细胞,周围分布少量胶原原纤维,可见退变甚至凋亡的纤维细胞,同时可见软骨细胞或成软骨细胞、成骨细胞等。第三部分方法:1.选取需行腰椎开放手术治疗的肝肾亏虚下腰痛患者及非肝肾亏虚下腰痛患者各30例,术中取腰椎椎旁肌组织;2.制作腰椎椎旁肌组织切片HE染色观察;3.透射电镜观察两组腰椎椎旁肌标本。结果:1.光镜下,非肝肾亏虚组椎旁肌肌纤维染色均匀,横纹清晰,胞膜完整,细胞形态结构正常,排列规则,可见多个细胞核,间质未见明显异常,无出血,未见明显炎症。肝肾亏虚组椎旁肌组织出现萎缩,肌纤维排列走向紊乱,可见大量肌纤维变性、坏死,胞质淡染、胞质中可见空泡,横纹模糊,有纤维化修复现象,肌肉组织内可见大量渗出。2.电镜下,非肝肾亏虚组腰椎椎旁肌组织横切面可见肌膜完整,肌细胞核形态正常,染色质均匀分布,肌丝组成肌原纤维,肌原纤维构成肌纤维,线粒体结构正常,肌浆网完整。纵切可见肌纤维内部排列紧密,横纹明显,肌原纤维粗细均匀,排列紧密,走向分明;肌浆网周围线粒体数量丰富,形态正常;肝肾亏虚老年人腰椎椎旁肌组织内肌膜尚完整;肌细胞核形态改变,出现细胞凋亡现象;肌纤维内各线、带结构紊乱;肌浆水肿,肌浆网扩张;肌原纤维缩小,紊乱扭曲,甚至部分肌丝溶解;线粒体数量明显减少,肿胀空泡化。结论:1.肝肾亏虚组腰椎小关节发生明显退变,肝肾亏虚可能通过影响软骨细胞衰老以及死亡、软骨功能减退引发小关节退变。软骨细胞过度凋亡在肝肾亏虚患者小关节软骨退变过程中发挥重要作用。2.肝肾亏虚组腰椎黄韧带发生明显退变,可能与肝肾亏虚调控成纤维细胞功能活动及后续发生多种生理和病理过程密切相关。且肝肾亏虚可能是引起弹力纤维破坏减少的原因之一,导致黄韧带弹性下降,维持脊柱稳定功能减弱。3.肝肾亏虚组腰椎椎旁肌发生明显退变,肝肾亏虚患者脾主运化功能同样受损,精血不足以濡养筋肉,肌肉能量代谢功能下降,肌量丢失,肌纤维结构老化、萎缩。同时“脾失健运”,可能导致脂代谢异常,脂质随着年龄的增长不断在肌肉组织中累积浸润,进一步加快骨骼肌萎缩。4.肝肾亏虚,脾失健运,精血化生不足,脏腑功能之间相互影响,筋、骨、肉失于濡养,进而使得腰痛发生、发展。