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目的 探讨慢病毒载体介导的RNA干扰真核生物翻译延长因子1δ(EEF1D)基因沉默对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤增殖及凋亡的影响。方法 针对人EEF1D基因设计并筛选出下调EEF1D基因表达效果最佳的siRNA,构建shRNA序列表达载体pLJM1-shRNA。通过慢病毒载体构建稳定转染pLJM1-shRNA-EEF1D的SKOV3、SKOV3/DDP细胞株。RT-PCR和WB检测慢病毒体外感染后干扰EEF1D基因效果。将人卵巢癌细胞株SKOV3/DDP注射到BABL/c鼠右侧肩胛下区建立人卵巢癌皮下移植瘤动物模型。待瘤子直径为0.3~0.4cm将裸鼠随机分为4组,分别为对照组、DDP+生理盐水组、DDP+shScrambled组和DDP+shEEF1D组,分别给予相应浓度药物。4周后处死,计算抑瘤率、局部浸润和转移情况,HE染色及TUNEL实验观察细胞形态学改变和细胞凋亡情况,WB检测肿瘤相关蛋白表达情况。结果 1.体外成功构建重组慢病毒载体pLJM1-shRNA-EEF1D。测得慢病毒的滴度为3.08×10~7TU/mL。体外慢病毒感染实验显示,在mRNA水平上与SKOV3shScrambled、SKOV3/DDP shScrambled相比SKOV3 shEEF1D、SKOV3/DDP shEEF1D明显敲减EEF1D mRNA的表达(F=95.94,P<0.05),在蛋白水平上,SKOV3 shEEF1D、SKOV3/DDP shEEF1D组EEF1D蛋白表达量下降(F=133.96,P<0.05)。2.体内实验显示DDP+shEEF1D组裸鼠皮下瘤生长明显受到抑制,抑瘤率为56.57%。HE染色结果显示,DDP+shEEF1D组细胞核高度浓缩,周围无细胞质包裹形成空晕,细胞之间分界不清。3.TUNEL结果显示,DDP+shEEF1D组裸鼠瘤组织细胞凋亡指数为61.71±9.26%,对照组与DDP+shScrambled组分别为4.13±1.14%、9.48±2.38%,DDP+shEEF1D组与对照组和DDP+shScrambled组相比较差异均有统计学意义(P<0.05)。4.WB结果显示,DDP+shEEF1D组诱导Cleaved caspase-3,p-PI3K和p-AKT蛋白表达增加,上调Bax表达,下调EEF1D和Bcl-2表达,与对照组和DDP+shScrambled相比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 通过敲减EEF1D基因表达可以抑制人卵巢癌细胞SKOV3/DDP细胞BABL/c鼠皮下移植瘤的生长并促进其凋亡,可能的机制是通过激活PIK3/AKT信号通路代偿机制,调控Bax/Bcl-2基因的表达。