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金线莲（Anoectochilus roxburghii）是一种极其珍贵的中草药，多产于中国、印度等亚洲国家，在我国主要来源于福建、台湾、广东及浙江等省份。虽然金线莲在民间有着传统的饮食习惯，但其野生资源匮乏，现以组织培养和人工种植为主。金线莲含有丰富的黄酮化合物，具有防肝损伤、降血脂、抗肿瘤、抗氧化及抑菌消炎等生理活性，其含量受品种、干燥方式、生长时间、栽培方式、种植密度、光照强度及温度等因素影响。目前关于金线莲黄酮化合物的研究主要为影响其含量的因素，对于其含量测定及分离纯化等方面研究较少。本文以金线莲为原料，对其黄酮化合物的测定、提取工艺及分离纯化等进行了系统的研究，主要研究结果如下：
（1）以芦丁和槲皮素为标准品，研究了直接法、NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 法、Al(NO3)3法、AlCl3法、硼酸-柠檬酸显色法、三乙胺显色法及 ZrOCl2显色法测定金线莲黄酮化合物的适应性，同时对最佳测定方法的显色条件进行了优化。试验结果表明，金线莲黄酮化合物的最佳测定方法为AlCl3法，与其余比色法相比，该法杂质干扰小、专属性好且准确度高；与HPLC法相比，测定结果接近、节省时间、操作简便且仪器价格低廉。优化后的最佳显色条件：0.1 mol/L AlCl3溶液8 mL， pH为5.4的乙酸钠-乙酸缓冲溶液4 mL，60℃水浴显色20 min，静置20 min，在波长403 nm处测定吸光度值，在此条件下，吸光度与黄酮化合物线性关系好，回归方程为Y= 0.02736X-0.00386，R2=0.9998。
（2）在金线莲黄酮化合物的提取研究中，通过三种提取方法的单因素实验分析了不同提取方法对其提取率的影响，实验结果表明，回流提取法获得的金线莲黄酮化合物最大提取率为0.853%，远小于超声辅助提取法获得的0.915%及微波萃取法获得的0.957%，因此对超声辅助提取法和微波萃取法进行响应面实验。采用微波萃取法从金线莲中提取黄酮化合物，在单因素试验的基础上，运用Box-Behnken试验设计研究了料液比、乙醇体积分数、微波功率及微波时间对提取率的影响。实验结果表明，料液比对金线莲黄酮化合物的提取率影响最大，其次是乙醇体积分数，微波功率和微波时间影响较小。获得的微波萃取金线莲黄酮化合物的最佳工艺条件：金线莲粉碎目数40目，浸泡时间1 h，料液比1:68，乙醇体积分数74%，功率350 W，微波时间4.0 min，获得的黄酮化合物平均提取率为1.109%。采用超声辅助提取法从金线莲中提取黄酮化合物，在单因素试验的基础上，运用 Box-Behnken试验设计研究了乙醇体积分数、超声时间、超声功率及超声温度对提取率的影响。实验结果表明，超声时间对金线莲黄酮化合物提取率的影响最大，其次是超声功率，乙醇体积分数和超声温度影响较小。获得的超声辅助提取金线莲黄酮化合物的最佳工艺条件：金线莲粉碎目数40目，浸泡时间4 h，料液比1∶40，乙醇体积分数80%，超声温度55℃，超声功率160 W，超声时间65 min，获得的黄酮化合物平均提取率为0.992%。微波萃取法获得的金线莲黄酮化合物提取率最高，与超声辅助提取法相比，实验周期短，能耗低，因而本课题选用微波萃取法。
（3）利用乙醇硫酸铵双水相萃取法分离纯化金线莲黄酮化合物，通过绘制乙醇硫酸铵相图，获得了形成双水相体系的临界系统，即乙醇和硫酸铵的质量分数分别为 8%～23.5%及 37%～15%，同时研究了硫酸铵质量分数、乙醇质量分数、金线莲粗提液质量分数、pH、氯化钠添加量及温度对双水相萃取分离效果的影响。通过单因素和正交实验，获得的最佳工艺条件：乙醇质量分数20%，硫酸铵质量分数17%，金线莲粗提液质量分数22%，pH为6，氯化钠添加量2.0%，温度20 ℃，此时黄酮化合物的平均萃取率为96.17%，换算出的黄酮化合物得率为72.62%。
（4）利用大孔吸附树脂法分离纯化金线莲黄酮化合物，通过分析吸附量、解吸量、吸附率、解吸率及吸附等温线，从大孔树脂D101、HPD600、AB-8、D301及 HPD100 中选出了最适合金线莲黄酮化合物分离纯化的树脂，并对其静态吸附和解吸特性进行了研究，同时还分析了影响该树脂静态吸附及解吸、动态吸附及解吸的因素。实验结果表明，AB-8型大孔树脂对金线莲黄酮化合物有较好的吸附和解吸性能，所获得的最佳静态吸附及解吸条件：吸附样液浓度C0，pH为6，吸附温度35 ℃，吸附料液比1∶20，解吸乙醇浓度80%，解吸温度35 ℃，此时黄酮化合物的得率为74.37%，纯度为70.89%。在静态吸附的基础上进行了动态吸附与解吸研究，得到的最佳实验条件：上样液浓度C0，上样液流速2 mL/min，洗脱剂用量60 mL，洗脱速度2 mL/min，此时黄酮化合物得率为75.75%，纯度为72.02%。对纯化后的金线莲黄酮化合物进行了简单的化学鉴定，通过六种颜色反应，初步判定其主要类型为黄酮及黄酮醇类。
（1）以芦丁和槲皮素为标准品，研究了直接法、NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 法、Al(NO3)3法、AlCl3法、硼酸-柠檬酸显色法、三乙胺显色法及 ZrOCl2显色法测定金线莲黄酮化合物的适应性，同时对最佳测定方法的显色条件进行了优化。试验结果表明，金线莲黄酮化合物的最佳测定方法为AlCl3法，与其余比色法相比，该法杂质干扰小、专属性好且准确度高；与HPLC法相比，测定结果接近、节省时间、操作简便且仪器价格低廉。优化后的最佳显色条件：0.1 mol/L AlCl3溶液8 mL， pH为5.4的乙酸钠-乙酸缓冲溶液4 mL，60℃水浴显色20 min，静置20 min，在波长403 nm处测定吸光度值，在此条件下，吸光度与黄酮化合物线性关系好，回归方程为Y= 0.02736X-0.00386，R2=0.9998。
（2）在金线莲黄酮化合物的提取研究中，通过三种提取方法的单因素实验分析了不同提取方法对其提取率的影响，实验结果表明，回流提取法获得的金线莲黄酮化合物最大提取率为0.853%，远小于超声辅助提取法获得的0.915%及微波萃取法获得的0.957%，因此对超声辅助提取法和微波萃取法进行响应面实验。采用微波萃取法从金线莲中提取黄酮化合物，在单因素试验的基础上，运用Box-Behnken试验设计研究了料液比、乙醇体积分数、微波功率及微波时间对提取率的影响。实验结果表明，料液比对金线莲黄酮化合物的提取率影响最大，其次是乙醇体积分数，微波功率和微波时间影响较小。获得的微波萃取金线莲黄酮化合物的最佳工艺条件：金线莲粉碎目数40目，浸泡时间1 h，料液比1:68，乙醇体积分数74%，功率350 W，微波时间4.0 min，获得的黄酮化合物平均提取率为1.109%。采用超声辅助提取法从金线莲中提取黄酮化合物，在单因素试验的基础上，运用 Box-Behnken试验设计研究了乙醇体积分数、超声时间、超声功率及超声温度对提取率的影响。实验结果表明，超声时间对金线莲黄酮化合物提取率的影响最大，其次是超声功率，乙醇体积分数和超声温度影响较小。获得的超声辅助提取金线莲黄酮化合物的最佳工艺条件：金线莲粉碎目数40目，浸泡时间4 h，料液比1∶40，乙醇体积分数80%，超声温度55℃，超声功率160 W，超声时间65 min，获得的黄酮化合物平均提取率为0.992%。微波萃取法获得的金线莲黄酮化合物提取率最高，与超声辅助提取法相比，实验周期短，能耗低，因而本课题选用微波萃取法。
（3）利用乙醇硫酸铵双水相萃取法分离纯化金线莲黄酮化合物，通过绘制乙醇硫酸铵相图，获得了形成双水相体系的临界系统，即乙醇和硫酸铵的质量分数分别为 8%～23.5%及 37%～15%，同时研究了硫酸铵质量分数、乙醇质量分数、金线莲粗提液质量分数、pH、氯化钠添加量及温度对双水相萃取分离效果的影响。通过单因素和正交实验，获得的最佳工艺条件：乙醇质量分数20%，硫酸铵质量分数17%，金线莲粗提液质量分数22%，pH为6，氯化钠添加量2.0%，温度20 ℃，此时黄酮化合物的平均萃取率为96.17%，换算出的黄酮化合物得率为72.62%。
（4）利用大孔吸附树脂法分离纯化金线莲黄酮化合物，通过分析吸附量、解吸量、吸附率、解吸率及吸附等温线，从大孔树脂D101、HPD600、AB-8、D301及 HPD100 中选出了最适合金线莲黄酮化合物分离纯化的树脂，并对其静态吸附和解吸特性进行了研究，同时还分析了影响该树脂静态吸附及解吸、动态吸附及解吸的因素。实验结果表明，AB-8型大孔树脂对金线莲黄酮化合物有较好的吸附和解吸性能，所获得的最佳静态吸附及解吸条件：吸附样液浓度C0，pH为6，吸附温度35 ℃，吸附料液比1∶20，解吸乙醇浓度80%，解吸温度35 ℃，此时黄酮化合物的得率为74.37%，纯度为70.89%。在静态吸附的基础上进行了动态吸附与解吸研究，得到的最佳实验条件：上样液浓度C0，上样液流速2 mL/min，洗脱剂用量60 mL，洗脱速度2 mL/min，此时黄酮化合物得率为75.75%，纯度为72.02%。对纯化后的金线莲黄酮化合物进行了简单的化学鉴定，通过六种颜色反应，初步判定其主要类型为黄酮及黄酮醇类。