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近几十年来,全球两栖类种群衰退十分严重,大量调查研究表明环境污染物与此有关。三苯基锡(TPT)被广泛用于农作物杀菌剂、木材防腐剂、船舶防污漆等,是典型的环境内分泌干扰物质。有研究表明,环境浓度下的TPT对两栖类胚胎具有毒性效应,且能引起热带爪蟾胚胎严重的鳍变窄现象。但TPT对两栖类胚胎的致畸机理并未阐明,且TPT通过“母体-卵”途径传递所引起的毒性影响也并未报道。本文以TPT和热带爪蟾胚胎为研究对象,通过溶液(外)暴露及显微注射(内)暴露两种方法,研究了TPT对热带爪蟾胚胎不同发育时期的致畸效应及可能机制,为探索TPT对两栖类种群的影响提供了科学依据。在前期爪蟾胚胎致畸实验FETAX的基础上,我们选用10 μgSn/L的TPT溶液对热带爪蟾胚胎从S8期(囊胚期)进行两天的12h分阶段暴露。结果发现,暴露组胚胎相比对照组存活率及体长显著减少,并表现出多种畸形现象如:鳍变窄、泄殖腔增大、皮肤色素减少、晶状体浑浊。其中以鳍变窄最为显著。而四个12h时段中,24-36 h暴露时段(约S32-S40期)下TPT对胚胎的致畸效应最强,为TPT的敏感阶段。之后,我们通过爪蟾全基因组表达谱芯片进一步探索TPT影响爪蟾胚胎的可能作用通路。结果表明,1-10 μgSn/LTPT的敏感阶段暴露引起了452个热带爪蟾基因的显著上调或下调(差异倍数≥2,P<0.05)。这些差异基因主要富集在ABC转运蛋白调控、血管平滑肌收缩以及PPAR信号通路中。定量PCR结果验证并表明了TPT抑制了PPARα和PPARγ的表达,其下游基因scd1、mmp1等受到更大影响。在此基础上,鉴于细胞凋亡在两栖类变态及组织重建中占重要地位,我们通过原位末端标记检测法检测了TPT对胚胎细胞凋亡的影响。结果显示1-10 μgSn/L的TPT敏感阶段暴露明显提高了胚胎鳍上细胞凋亡水平,其中5 μgSn/L组凋亡密度最大,为对照组的3.22倍。我们通过定量PCR检测了16个凋亡相关基因的表达水平,13个基因与对照组相比都存在显著变化。caspase9及p53在其中扮演重要角色。TPT介导的细胞凋亡可能是鳍变窄表型的主要原因。之后,为了探究TPT通过“母体-卵”途径传递对热带爪蟾胚胎的发育毒性,我们通过显微注射将FETAX实验中的暴露起点(S8期)提前到了S2期,使得TPT能在S2期就进入胚胎,模拟了环境中由母体转移至胚胎的TPT致毒过程。结果表明,注射1-5 ngTPT后胚胎的存活及生长均受到影响。但与溶液(外)暴露不同的是,显微注射(内)暴露引起的畸形效应主要为小头畸形及小眼(甚至无眼)畸形,且并未出现窄鳍表型。另一方面,我们利用整胚原位杂交检测了S20期及S25期注射过TPT的胚胎中头部及眼部标志基因的空间表达。发现前脑标志基因bf1、中脑标志基因en2、后脑标志基因krox20以及眼睛标志基因pax6的表达范围均显著缩小且部分信号呈弥散状。说明TPT对热带爪蟾胚胎具有极强的神经毒性,且在显微注射(内)暴露中与溶液(外)暴露中表现出的敏感阶段特性不同。与此同时,我们也将PPARy的激动剂罗格列酮(rosiglitazone, Rosi)、抑制剂T0070907注射进胚胎与TPT进行比较研究。结果发现Rosi对胚胎的毒性较小,而注射5 ngT0070907的热带爪蟾胚胎出现了类似于TPT的头、眼部畸形表型。T0070907与TPT联合注射也出现了明显的协同效应。这为我们研究TPT与PPARy的联系提供了重要线索。综上所述,本文表明水环境中的TPT以及母体转移至胚胎中的TPT对热带爪蟾胚胎均具有极强的发育毒性。PPAR信号通路及细胞凋亡在致毒过程中扮演重要角色。本文丰富了TPT对脊椎动物胚胎的毒性研究,也为TPT的毒理机制作出了一定贡献。