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轮状病毒是世界范围内引起婴幼儿病毒性腹泻的主要病原体,在发展中国家有较高的发病率和死亡率。因此,研制一种安全有效的轮状病毒疫苗成为当务之急。VP7是轮状病毒的主要外壳蛋白及中和抗原,是发展基因工程疫苗的首选。干扰素是一种细胞因子,它在诱导细胞的抗病毒、抗生长反应及调节免疫反应中起关键作用。抗原与细胞因子结合,细胞因子可通过抗原导向靶细胞,同时也可发挥免疫佐剂作用。通过构建VP7及α-2b干扰素融合蛋白基因转化植物,为研制一种新型的预防兼治疗的植物疫苗提供一条新的途径。 本研究利用重组PCR技术,借助肌球蛋白重链的7个氨基酸残基的编码序列将VP7基因和干扰素基因连接起来,构建成全长约为1500bp的VP7-LK-IFNa-2b融合蛋白基因。将该基因导入pBI121植物表达载体,再通过直接转化法构建了VP7-LK-IFNa-2b/pBI121的根瘤农杆菌(EHA105)工程菌。采用根癌农杆菌介导的遗传转化体系将VP7-LK-IFNa-2b融合基因转入番茄,通过Kan的初步筛选获得了6株,经PCR、PCR-Southern blot检测均呈阳性,再经Southern blot分析证明有2株转基因植株其目的基因已整合至核基因组中。SDS-PAGE分析表明转基因植株在蛋白质水平上获得了较高的表达,且表达产物的分子量为55kD,这与VP7-LK-IFNa-2b融合蛋白的理论推导值基本一致。