为防治海水鱼哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)病，本研究制备了福尔马林灭活的哈维氏弧菌ML01株灭活疫苗，并对其免疫保护效果进行了评价。首先通过人工感染实验评价哈维氏弧菌ML01株对牙鲆(Paralichthys olivaceus)的致病力，然后对健康牙鲆腹腔接种哈维氏弧菌灭活疫苗和免疫佐剂——黄芪多糖(Astragalus polysaccharides, APS)和蒲公英多糖(Taraxacum polysaccharides,TP)。利用实时荧光定量PCR检测免疫后多时间点牙鲆脾脏和头肾中转录因子(NF-κB)、主要组织相容性复合体(MHCⅠ、MHCⅡ)、细胞表面受体(CD4、CD40)、Toll样受体(TLR2)、热休克蛋白(HSP70)、白细胞介素 (IL-6)、自然杀伤细胞增强因子(NKEF)的mRNA表达量。采用间接ELISA法对免疫后各组牙鲆血清抗体效价进行测定，并测定血清中三种非特异性免疫相关酶——超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)、酸性磷酸酶(Acid Phosphatase, ACP)和碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, AKP)的活性。最后，在免疫四周后用菌株ML01对免疫牙鲆进行攻毒，评价疫苗的保护效果。研究结果显示，哈维氏弧菌ML01株对牙鲆的半数致死量(LD50)为4.64×106 CFU/mL。对牙鲆腹腔接种灭活疫苗、两种多糖配合疫苗和两种多糖均能引起牙鲆免疫相关基因mRNA相对表达量上升，各免疫相关基因表达量的最高值能够达到对照组的7.65—393.45倍。同时各组免疫接种也能够显著提升鱼体的超氧化物歧化酶、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性以及血清抗体效价。使用哈维氏弧菌ML01对牙鲆攻毒的结果显示，接种了灭活疫苗、黄芪多糖配合疫苗、黄芪多糖、蒲公英多糖配合疫苗、蒲公英多糖的各试验组，其相对免疫保护率分别为73.68%、78.95%、49.12%、82.46%和45.61%。因此，本研究制备的哈维氏弧菌灭活疫苗能降低被感染牙鲆的死亡率，两种多糖作为免疫佐剂均能够提升哈维氏弧菌灭活疫苗对牙鲆的保护效果。　　“褐龙斑”是以褐石斑鱼（ Epinephelus bruneus ）为母本、鞍带石斑鱼（ E. lanceolatus）为父本杂交产生的子代。作为杂交石斑鱼的新品种，国内外尚没有褐龙斑疾病的报道。2017年7月，山东某养殖场的4000余尾2龄褐龙斑突然发病，并出现急性死亡，10天内累积死亡率高达80%。现场调查发现，发病池水温为28 ℃、盐度为31。病鱼外观无明显异常，但反应迟钝，活力差，伏底死亡。临床检查和剖检可见病鱼鳃丝鲜红，无溃烂；胃、肠无食物，但无明显发炎；肝局部出血，脾和肾严重肿大、易碎，肾脏色淡。在苏木精-伊红(HE)染色的组织病理切片中，观察到各组织病变严重。病鱼脾、头肾造血组织坏死，存在大量嗜碱性、细胞质均一、直径10—15 μm的肿大细胞；肝组织局灶性坏死，肾小球血管球细胞水样变性，次级鳃丝的上皮细胞剥离、脱落，部分柱细胞断裂；心肌纤维结构紊乱、退化变性，心肌细胞坏死。在超薄组织切片中，病鱼脾、头肾等组织的肿大细胞的细胞质内存在大量直径130—150 nm的虹彩病毒样颗粒。肿大细胞的细胞膜内陷，形成大量的树枝状沟回结构。各组织细胞的线粒体肿胀、空泡化，出现大量纵向嵴；心肌细胞内的线粒体大量退化成髓样体。使用特异性的PCR引物，从病鱼脾、头肾、肾、肝等组织中均检测到真鲷虹彩病毒（red seabream iridovirus, RSIV）的高强度感染，与电镜观察结果相符。测定了该病毒主要衣壳蛋白（major capsid protein, MCP）基因的全长编码区，长度为1362 bp。经Blast比对，该序列与感染褐点石斑鱼（E. fuscoguttatus）、斜带石斑鱼（E. coioides）、真鲷（Pagrus major）、高体鰤（Seriola dumerili）的4株RSIV相应序列完全一致，相似性为100%。依据MCP基因的全长编码区序列，构建了19种（株）虹彩病毒的系统发育树。结果显示，感染褐龙斑的虹彩病毒在分类地位上属于虹彩病毒科细胞肿大病毒属RSIV类群。本文不仅证实了RSIV可以自然感染杂交石斑鱼“褐龙斑”，揭示了RSIV新的敏感宿主，也为杂交石斑鱼病毒病的诊断与防治提供了重要的参考依据。