论文部分内容阅读
第一部分p28Gank在巨噬细胞中的作用及机制研究炎性微环境参与了许多疾病的发生发展过程,而巨噬细胞作为一类单核细胞来源的免疫辅助细胞在炎性微环境中发挥着重要的作用。以巨噬细胞为主进行的炎症信号通路研究对于指导炎症相关疾病的治疗具有重要的意义。p28Gank（也被称为p28、Gankyrin、PSMD10）是在肝癌中被发现的相对特异性高表达的癌蛋白,在细胞周期、细胞凋亡以及肝癌干细胞调控中都发挥着重要的作用。本课题组前期研究显示IL-1β/IRAK1炎症信号通路可以上调p28Gank影响肝癌预后。迄今为止,尚未见到p28Gank在炎性微环境中功能的相关报道,而且本课题组前期研究提示p28Gank与炎症相关信号通路具有一定的关联,因此,在巨噬细胞中开展p28Gank与炎症相关通路的研究具有重要意义。本课题运用本实验室构建的p28Gank条件过表达以及敲除小鼠,通过内毒素休克模型,研究p28Gank对炎症的影响,并通过腹腔巨噬细胞炎症模型,探讨p28Gank与炎性信号通路的联系。通过研究发现:小鼠腹腔来源巨噬细胞与骨髓来源巨噬细胞,经不同的激动剂处理后,内源性的p28Gank表达水平均显著上调;条件性敲除小鼠模型显示,巨噬细胞中p28Gank的缺失可导致LPS介导的炎性因子IL-6及TNF-a下调,减轻了内毒素休克反应;相反,条件性过表达p28Gank小鼠实验表明,巨噬细胞中过表达p28Gank可导致LPS介导的炎性因子IL-6及TNF-α上调,提示p28Gank可调控巨噬细胞炎性因子的分泌;初步的分子机制显示,p28Gank可能通过影响PI3K/AKT信号通路调节了巨噬细胞中炎性因子的分泌。该发现对于认识p28Gank在炎症及炎性微环境中的功能具有重要的指导意义。第二部分IRAK1在肝癌中的功能及机制研究原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是常见的恶性高发性肿瘤之一,占据了中国恶性肿瘤发病率的第三位。面对如此严峻的形势,虽然我国已经积累了多年的肝癌研究成果却仍然不得不承认,到目前为止对于肝癌的具体发病机制仍旧不十分清楚,肝癌的治疗仍旧缺乏较好的手段。因此,研究肝癌发生发展的分子机制,寻找新的诊断标志物以及治疗靶点是目前科学研究的重要目标。本课题前期研究发现IL-1β/IRAK1信号通路可以上调p28Gank影响肝癌患者预后。在此基础上,进一步针对IRAK1在肝癌中的功能展开研究。通过临床样本检测,发现IRAK1在肝癌组织中存在高表达;通过不同肝癌细胞系研究发现,IRAK1可促进肝癌细胞的增殖,抵抗化疗药物介导的凋亡;在分子机制上表现为:IRAK1通过影响Cyclin D1的蛋白水平促进肝癌细胞的增殖;IRAK1主要通过外源性凋亡通路而非线粒体途径抑制肝癌细胞的凋亡从而增强其对化疗药物顺铂（cisplatin）的耐受;IRAK1还可以通过核输出途径影响NF-κB/p65的入核进而调控其下游抗凋亡基因的表达。本研究首次发现了IRAK1分子在肝癌中差异表达及其在肝癌细胞中的促增殖及抗凋亡功能,对进一步认识IRAK1分子在肝癌中的生物学功能具有重要的指导意义。