论文部分内容阅读
灰树花是珍稀的药食两用真菌，具有重要的食、药用价值。近年来，随着人们对灰树花需求的增加，灰树花栽培产业在国内获得了快速发展。另一方面，由于灰树花液体深层发酵过程和产品质量的可控性，以及不需要占有土地、消耗林木，且生产周期短的优势，也得到了飞速发展。目前，对于灰树花营养和药理的研究主要集中在子实体上，对于菌丝体的相关研究较少，而对灰树花菌丝体的营养和药理活性物质的研究，对于灰树花子实体和发酵菌丝体的合理应用具有重要意义。本文在对4株“灰树花”菌株进行分子鉴定的基础上，筛选得到一株发酵性能优良的灰树花菌株，并对该菌株进行了栽培和50L扩大发酵，制备出子实体和发酵菌丝体，然后对子实体和发酵菌丝体的非挥发性成分、挥发性成分、多糖进行了研究，论文取得的主要结论如下：1.对4株“灰树花”菌株进行了分子鉴定，确定其中3株为灰树花，1株为灵芝，并从3株灰树花菌株中筛选得到发酵性能优良菌株GF04；2.对GF04进行了50L发酵罐扩大发酵，菌丝体和发酵液冻干粉得率分别达到了11.93g/L、28.9g/L。对发酵菌球形成过程及发酵过程中菌块、菌球形态变化规律进行观察后得出，形态变化可以作为pH、生物量、溶氧等发酵进程指标的重要辅助指标；3.在实验室栽培灰树花过程中，利用工农业下脚料配制了6个灰树花栽培配方，栽培效果表明：以阔叶木屑为主的配方比较适宜灰树花生长，生物转化率达到40%以上，而添加木薯渣、味精渣等工业废料的培养料则不适宜灰树花的生长；4.采用扫描电镜对灰树花子实体、液体和固体发酵培养菌丝体进行观察后发现：3种菌丝体在粗细、均一性等方面差异较大，液体发酵菌丝体有横隔，没有锁状联合，而子实体中菌丝体有横隔和锁状联合，并且具有典型的担子菌产孢结构；5.对灰树花子实体和液体发酵菌丝体成分比较研究后发现：灰树花子实体与液体发酵菌丝体在非挥发性成分组成上差异较大，发酵菌丝体中粗蛋白、粗脂肪、还原糖、总糖、游离氨基酸、水解氨基酸含量高于子实体；而子实体中粗纤维、不饱和脂肪酸、风味核苷酸等含量要高于菌丝体。子实体中鉴定出62种挥发性化合物，以醇类、酮类、醛类为主；菌丝体中鉴定出94种挥发性化合物，以醛类、酮类、醇类、酯类为主；6.经过除粗脂肪、沸水提取、脱蛋白、H2O2脱色、透析、冷冻干燥等工艺制备得到灰树花子实体、菌丝体精制多糖，得率分别为1.30%、1.40%。灰树花发酵液超滤后粗多糖制备精制多糖的得率为11.03%。灰树花子实体多糖适宜的提取料液比为1:30，提取次数3次；7.通过DEAE Sepharose Fast Flow和Sephadex G-200柱层析，从子实体中得到均一多糖GF04FIPS01、GF04FIPS02；从菌丝体中得到均一多糖GF04MIPS01、GF04MIPS02、GF04MIPS03、GF04MIPS04、GF04MIPS05、GF04MIPS06、GF04MIPS07；从发酵液中得到均一多糖GF04EPS01、GF04EPS02。对其中10个组分的分子量、多糖含量、蛋白含量、糖醛酸含量、单糖组成进行了测定，结果表明：10种均一多糖复溶性差异较大，GF04MIPS05、GF04MIPS06、GF04FIPS02复溶性较好；GF04EPS02、GF04MIPS02复溶性较差，10个样品蛋白含量在0.84%-5.74%之间，糖醛酸含量在4.41%-21.90%。GF04FIPS01、GF04FIPS02分子量为60.32、47.01万，均含有葡萄糖、半乳糖、岩藻糖、甘露糖，GF04MIPS01、GF04MIPS02、GF04MIPS04、GF04MIPS05、GF04MIPS06、GF04MIPS07分子量从2.03-175.8万，GF04MIPS01、GF04MIPS01含有葡萄糖和少量甘露糖，其他组分均只含有葡萄糖；GF04EPS01、GF04EPS02分子量分别为1.50、1.91万，GF04EPS01含有葡萄糖、岩藻糖、甘露糖、半乳糖4种单糖，GF04EPS01则还含有阿拉伯糖、木糖两种多糖；8.红外研究表明，10种多糖均为吡喃型多糖，GF04FIPS02、GF04MIPS04、GF04MIPS05、GF04MIPS07、GF04EPS01仅含有α-型糖苷键，GF04FIPS01、GF04MIPS01、GF04MIPS02、 GF04MIPS06、 GF04EPS02同时含有α-、 β-两种糖苷键。分别对GF04FIPS02、GF04MIPS01、GF04MIPS05、GF04EPS01四个组分进行了1H-NMR和13C-NMR分析后得出， GF04FIPS02含有→3)-α-D-Manp-(1→、 α-D-Galp-(1→、→6)-α-D-Glcp-(1→、 α-L-fucp-(1→糖苷键； GF04MIPS01含有β-D-Glcp-(1→、→3)-β-D-Glcp-(1→、→3)-α-D-manp-(1→糖苷键；GF04MIPS05含有→3)-α-D-Glcp-(1→、→3,6)-α-D-Manp-(1→糖苷键；GF04EPS01含有→3)-α-D-Manp-(1→、→3)-α-D-Glcp-(1→、→3)-α-L-Fucp-(1→糖苷键。