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目的:
微小RNA(miRNA)为一类在动植物中广泛存在的非编码小RNA,由21~25个核苷酸构成。miRNA参与了生命过程中一系列的重要过程包括早期发育、细胞增殖、分化、凋亡、死亡。近期的研究还发现,多个miRNA与肿瘤的发生、病理分级、临床分期、耐药性、诊断、治疗和预后密切相关。此外,在miRNA靶基因数据库中发现表达异常的miRNA所靶定的基因竟然占据了所有知名的癌基因的44%之多。更加确定了miRNA与肿瘤存在不可忽视的关系。近年来研究表明,miRNAs在细胞生长、分化、和凋亡等过程中发挥重要作用,与肿瘤的发生、发展及预后紧密相关。卵巢癌在妇科肿瘤中死亡率最高,尽早发现卵巢癌的诊断性标志物及有效的靶向治疗手段对卵巢癌的早期诊断及治疗是至关重要的。在本研究中,我们参考国内外相关文献及前期关于卵巢癌的miRNA表达谱的研究,初步确定miR-152为我们的研究重点。通过使卵巢癌细胞中过表达miR-152、构建卵巢癌裸鼠移植瘤模型、测量肿瘤体积、绘制肿瘤生长曲线、计算抑瘤率研究其在实体瘤中的抑瘤作用,探索miR-152与卵巢癌裸鼠转移瘤相关性,对进一步明确卵巢癌发生机制及治疗有着重要的意义。
方法:
一、瞬时转染miR-152
向卵巢癌细胞系中(OVCAR3)转染miR-152,使miR-152在卵巢癌细胞中过表达,通过RT-PCR验证转染效率。
二、miR-152对卵巢癌裸鼠移植瘤的作用
收集转染后的卵巢癌细胞系(OVCAR3),分为实验组,阴性对照组、空白对照组,分别注射于裸鼠颈背部皮肤,建立裸鼠移植瘤模型,测量肿瘤体积、绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤抑制率。
结果:
一、验证mi R-152转染OVCAR3细胞成功
OVCAR3在转染了miR-152 mimics后,经real-time PCR检测验证,转染了miR-152 mimics的实验组细胞中,miR-152的表达水平较对照组有所提高。
二、miR-152对卵巢癌裸鼠移植瘤的作用
成功建立裸小鼠移植瘤模型,观察45天后,发现转染了miR-152的实验组细胞体内成瘤能力显著下降,与空白对照组及阴性组相比,抑瘤率为78.22%,74.86%
结论:
miR-152过表达抑制卵巢癌细胞OVCAR3体内成瘤。