启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤调节hEGF刺激的人食管癌EC9706细胞生长信号转导的研究

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目的:通过观察hEGF刺激的食管癌EC9706细胞的增殖,及启膈散、沙参麦冬汤、通幽汤、补气运脾汤各证方对hEGF刺激的EC9706细胞增殖的影响,探讨hEGF及启膈散等证方在食管癌病变中的作用;通过观察PLC-γ1和PI3K介导的生长信号转导通路蛋白表达,从细胞生长信号转导角度揭示启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤各证方治疗食管癌的作用机制和差异,以方测证,探讨食管癌中医病机“痰、气、燥、瘀”的分子生物学内涵。 方法:体外培养人食管癌细胞株EC9706细胞,以体外hEGF刺激细胞,观察细胞增殖和形态;MTT法检测hEGF对细胞增殖影响的量效关系;PI单染标记流式细胞术检测hEGF对EC9706细胞厨期的影响。分别用启膈散、沙参麦冬汤、通幽汤和补气运脾汤作用hEGF刺激的EC9706细胞,在倒置显微镜下观察细胞增殖和形态变化:MTT法检测各证方对hEGF刺激的细胞增殖影响的量效关系;PI单染标记流式细胞术检测启膈散等方对hEGF刺激的EC9706细胞周期的影响。Western blot分析检测各证方对hEGF刺激的EC9706细胞PLC-γ1和PI3K介导的生长信号通路蛋白表达的影响。 结果:1.hEGF对EC9706细胞具有刺激增殖作用,在较高浓度呈浓度依赖性:2.启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤可不同程度地明显抑制hEGF刺激的人食管癌EC9706细胞增殖,其抑制率呈浓度依赖性;补气运脾汤无明显抑制作用;3。启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤对hEGF刺激的EC9706细胞PLC-γ1介导的细胞生长信号转导通路中蛋白表达具有不同程度的抑制作用。启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤组明显抑制PLC-γ1蛋白表达,通幽汤和启膈散组最强,沙参麦冬汤组次之;4.启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤对hEGF刺激的EC9706细胞PI3K介导的细胞生长信号转导通路中蛋白表达具有不同程度的抑制作用。启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤组明显抑制PI3K蛋白表达,通幽汤和沙参麦冬汤组最强,启膈散组次之。 结论:hEGF可以刺激人食管癌EC9706细胞增殖,其对细胞增殖的作用呈量效、时效关系。启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤通过对hEGF刺激的EC9706细胞PLC-γ1和PI3K介导的细胞生长信号转导的抑制作用,可不同程度地抑制hEGF刺激的食管癌EC9706细胞的增殖,三者抑制率呈药物浓度依赖性,补气运脾汤对此细胞无明显抑制作用。以方测证,食管癌中医病机中的痰、气、燥、瘀与PLC-γ1和PI3K介导的生长信号转导增强有关。
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