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目的:通过动物实验观察滋阴补肾法对衰老大鼠免疫功能及凋亡蛋白酶的影响,并初步探讨滋阴补肾法延缓衰老的可能机制。方法:1.分组:将健康Wistar大鼠40只随机分为四组,正常组(空白组/N组)、模型组(对照组/M组)、阳性对照组(维生素E组/P组)、滋阴补肾组(六味地黄治疗组/NK组),每组10只。2.造模及给药:M组、P组及NK组给予D-半乳糖100mg/kg·d腹腔注射,N组给予同等体积生理盐水注射。随后灌胃给药,P组给予维生素E0.027g/kg·d灌胃,NK组给予六味地黄丸3.24g/kg·d灌胃,N组和M组给予同样体积生理盐水灌胃。3.观察指标及检测方式:每周观察各组大鼠的一般状态并称取体质量,根据体质量调整用药剂量。连续8周。最后一次给药2小时后,采大鼠眼眶血1.5ml。取0.5ml血应用全自动生化分析仪测定大鼠尿素氮(BUN),血肌酐(Scr)。另1ml大鼠血采用硝酸酶还原法(Griess)测定一氧化氮(NO)及一氧化氮合成酶(NOS)值。麻醉并处死大鼠后,剥离各组大鼠胸腺及脾脏称重,胸腺或脾脏重量与体重的百分比分别为免疫器官指数。取各组大鼠肾脏行免疫组化:首先包埋组织石蜡中,切片,脱蜡,EDTA抗原修复液盒中行抗原修复,再将切片放入3%过氧化氢溶液中阻断内源性过氧化物酶,3%BSA封闭,后加入配置好的一抗Bcl-2、Bax及Caspase-3,然后DAB显色并复染细胞核,最后脱水,中性树胶封片,并行显微镜镜下检查,采集图像。制定免疫组化评分评价各组大鼠肾脏组织中凋亡蛋白显像及强弱的差异。统计学分析行正态和方差齐性检验后处理组间采用方差分析,两两比较用LSD-t检验。结果:1.一般情况:N组大鼠摄食正常,毛发浓密有光泽,活泼好动,不易捉取;M组大鼠逐步出现皮毛萎黄,大便稀溏,饮食明显减少,爬行跑动缓慢,反应迟钝等与自然衰老大鼠类似的症状;P组和NK情况介于两者之间。体质量方面,第3周时组间差异具有统计学意义(P<0.05),至第6周时组间差异有显著统计学意义(P<0.01);至第八周结束时,组间差异显著(P<0.01),M组(345.30±12.42)与N组(375.80±5.87)、M组与NK组(371.45±8.48)组间差异显著(P<0.01)。NK组与N组、NK组与P组有统计学差异(P<0.05)。2.各组大鼠用药后肾功能指标比较:BUN(mmol/L)、Scr(μmol/L)两项指标组间比较有显著统计学差异(P<0.01)。再经两两比较示M组(17.3±4.12,101.12±25.67)与N组(7.34±0.55,33.75±5.61)、M组与NK组(12.5±2.31,85.67±17.65)有显著统计学差异(P<0.01),NK组与N组有统计学差异(P<0.05),而NK组与P组(13.1±2.54,87.58±18.97)无明显统计学差异。3.免疫功能:3.1免疫器官指数方面,8周后各组胸腺指数有统计学差异(P<0.05),且两两比较发现M组(0.99±0.27)与N组(1.34±0.19)比较有统计学差异(P<0.05)。脾脏指数差异有统计学意义(P<0.05),且M组(1.67±0.44)与N组(2.19±0.68)比较有显著统计学差异(P<0.01),M组与NK组(2.06±0.52)比较有统计学差异(P<0.05)。3.2各组大鼠血清一氧化氮、一氧化氮合成酶指标的比较:各组一氧化氮(μmol/L)含量差异显著(P<0.01)。其中,M组一氧化氮含量(253.5±31.8)较N组(154.3±32.8)、P组(192.5±35.6)显著升高(P<0.01),较NK组(216.5±32.2)升高(P<0.05);与N组相比,P组及NK组一氧化氮升高也具有统计学意义(P<0.05),而P组与NK组之间比较无明显差异(P>0.05)。各组一氧化氮合成酶(μmol/L)含量具有统计学差异(P<0.05)。其中,M组一氧化氮合成酶含量(44.4±6.7)较N组(29.8±5.6)显著升高(P<0.01),较P组(32.6±4.8)、NK组(33.2±5.1)升高(P<0.05);与N组相比,P组及NK组一氧化氮合成酶升高也具有统计学意义(P<0.05),而P组与NK组之间比较无明显统计学差异(P>0.05)。4.各组大鼠肾脏Bcl-2、Bax及Caspase-3的比较:Bcl-2表达方面,模型组较正常组、阳性对照组、滋阴补肾组表达明显减少,细胞染色浅,阳性细胞数目少,评分有显著统计学差异(P<0.01),而滋阴补肾组与正常组无明显统计学差异(P>0.05)。Bax表达方面,模型组较正常组、阳性对照组、滋阴补肾组表达明显增多,细胞染色深,阳性细胞数目多,评分有显著统计学差异(P<0.01),而滋阴补肾组与阳性对照组无明显差异(P>0.05)。Caspase-3方面,模型组较正常组、滋阴补肾组表达明显增多,细胞染色深,阳性细胞数目多,评分有显著统计学差异(P<0.01),且滋阴补肾组与阳性对照组有统计学差异(P<0.05)。结论:衰老大鼠体质量、肾功能及免疫器官指数等均较正常大鼠减少,相反,一氧化氮、一氧化氮合成酶的分泌及细胞凋亡较正常大鼠增多,而六味地黄丸为代表的滋阴补肾法可延缓衰老大鼠体质量、肾功能及免疫器官指数的下降,抑制一氧化氮、一氧化氮合成酶的分泌及细胞过度凋亡。因而滋阴补肾法可能对衰老大鼠的免疫功能产生一定影响,进而延缓其衰老的进程。