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猕猴是目前研究人类AIDS疫苗最理想的模型动物,而动物对病毒的细胞免疫反应受到主要组织相容性复合物系统(MHC)的调节和限制,中国恒河猴分布广泛,不同地域恒河猴具有不同遗传学特征,本文通过对不同地域恒河猴MHC-I型基因进行分型研究,了解了MHC在不同遗传背景恒河猴中的分布特点;并通过对携带特殊位点恒河猴的筛选,为本中心组建携带有特殊已知基因的种群,定向培育出具有特殊基因型的恒河猴打下了基础。
采用序列特异性引物PCR(PCR-SSP)技术对来源于广西、海南以及各地域杂交群(后称杂交群)(分别为30、34和183只)的三个群体共247只恒河猴进行了Mamu-A*01、A*02、A*08、B*01和NA7等五个MHC-I型分子位点的检测。结果显示A*OI、A*02仅在海南猴群和杂交群中被发现,在这两个猴群的阳性率分别为2.94%、0.54%和8.82%、0.54%;A*08仅发现于杂交群中,阳性率为3.8%:B*01在广西猴群和杂交群中被发现,比例依次为20%和17.48%;NA7在广西群、海南群和杂交群三个猴群中均有发现,阳性率依次为46.67%、32.4%和46%。
对中国恒河猴Mamu-A*01、B*01以及NA7的PCR产物进行cDNA测序分析,结果显示Mamu-A*01的核苷酸序列与印度恒河猴的核苷酸序列相差比较大,吻合率只有92%-97%。Mamu-B*01和NA7基因与印度恒河猴对应序列的核苷酸差异较小,相似度为99%-100%。
对Mamu-I型基因的部分序列进行了扩增测序,序列长度为1067-1088bp,与印度恒河猴的已发表序列比对,结果显示相似性度为90%-99%:02205号、99450号、02206号恒河猴PCR产物序列与印度恒河猴Mamu-A*04序列相似,相似度均为99%,02208号恒河猴PCR产物序列与印度恒河猴的Mamu-A*04序列相似度为90%:01525号恒河猴PCR产物序列与印度恒河猴的Mamu-A*06序列相似度为97%;03104号与Mamu-A*03相似度为90%。推导的氨基酸序列与已发表的印度恒河猴对应序列比较,相似度为61%-100%。
上述结果提示,不同地域来源的中国恒河猴群体之间携带的MHC-I型等位基因频率存在明显的差异,与印度恒河猴之间携带的MHC-I型等位基因频率也有显著差异,序列差异也比较明显,有必要对中国恒河猴携带的优势位点做进一步研究,以完善中国恒河猴作为细胞免疫和AIDS疫苗测试动物模型的建立;Mamu-A*01、A*02、A*08等基因在本中心恒河猴中的携带率比较少,为了进行携带这些等位基因的特殊种群的有效组建与定向培育,有必要对其他繁殖种群乃至野外种群进行进一步研究探测;而且,不同地域恒河猴所携带等位基因的不同频率有利于我们对动物选择范围的确定;通过对247只恒河猴5个等位基因的分型研究,清楚的了解了本中心所检测恒河猴的MHC-I型基因的遗传背景,有利于MHC基因型一致的恒河猴作为实验用猴的选用。