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目的:本研究旨在建立一种从新鲜冰冻血浆中提取凝血因子V(Coagulation factor V，FV)的方法，并用提取的FV为抗原免疫小鼠，以建立抗人FV单克隆抗体细胞株，为利用FV单克隆抗体研制FV检测试剂做准备。
方法:(1)通过对实验温度、时间和加入血浆中的酶抑制剂的选择，探索能够保持FV稳定的纯化条件；采用柠檬酸钡吸附、聚乙二醇6000分级沉淀，对血浆进行预处理，获得富集FV的血浆；通过DEAE—Sepharose FF离子交换层析提取FV；利用Sephacry1—S300凝胶过滤层析获得纯度较高的FV；超滤浓缩后加保存液冻存。(2)以纯化的人FV为抗原免疫BALB/c小鼠，将免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合，HAT选择培养基筛选培养；用间接酶联免疫吸附试验筛选出抗人FV阳性细胞株，对杂交瘤细胞进行亚克隆并进行细胞染色体核型分析，筛选可稳定分泌FV单克隆抗体细胞株。
结果:-80℃存放的新鲜冰冻血浆转4℃放置5h，37℃水浴快速融化后再转至4℃，添加蛋白酶抑制剂，整个纯化过程控制在4℃进行，能较好的保持FV的稳定和回收率。电泳图谱显示：添加二异丙基氟磷酸(DFP)要比未加DFP获得的未降解FV多。经过对血浆预处理和两步层析后，FV活性回收率为11.21±3.54％，比活性为30.46±0.31U/mg，浓缩倍数为2538.33±25.83倍。初步建立起4株分泌抗人FV的单克隆抗体细胞株，命名为AFV001～004。
结论:①本实验设计的纯化方法能够较有效的浓缩人血浆中的FV，并制备出较高纯度的FV；②初步建立起抗人FV的单克隆抗体细胞株。