泛素化E3连接酶RNF151在小鼠精子形变过程中的结构和功能研究

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在精子发生过程中,生精细胞从基因表达到细胞形态都发生剧烈变化,正常细胞内大部分的细胞器和蛋白质都被降解或者以残体的形式被丢弃。在这一过程中,泛素—蛋白酶体通路(UPP)被认为起了重要作用。在精子发生的许多关键阶段,比如减数分裂,顶体形成,精子的成熟,UPP相关组成单位都行使着十分积极而活跃的功能,其异常的结构和表达会导致精子发生的异常和不育。  UPP在精子发生中作用的研究还处于初级阶段。本实验室前期的研究通过生物信息学的方法发现了一个未曾被报道的睾丸特异的环指蛋白RNF151,并且找到了它的相互作用蛋白DYSBINDIN。近来我们挖掘了睾丸特异表达的E3连接酶,进一步证实了Rnf151是一个睾丸特异性的E3连接酶并且其RNA仅仅出现在圆形和延长型精子中。  在本研究实验中,我们通过在睾丸冰冻切片以及通过密度梯度沉降法获得的圆形精子和延长型精子,利用免疫荧光实验证明了RNF151表达于圆形精子的细胞核以及延长型精子的顶体上。并通过免疫共沉淀以及泛素化和降解实验证明了DYSBINDIN以及另一个疑似的相互作用蛋白KBTBD7并不是RNF151的泛素化底物。进一步通过构建多种点突变以及缺失载体证明了RNF151的酶活性与完整的RING结构域有关,且RNF151的N端和C端都能结合自身形成多聚体。  然而RNF151基因敲除小鼠可以生出正常数量的健康后代,不论是小鼠的体型的大小,睾丸重量,精子数量还是精子活力都表现正常,从睾丸切片的组化结果观察来看,小鼠的精子发生是正常的。虽然从目前的结果看RNF151这个基因对于小鼠生育力不是必需的,基于Rnf151在从小鼠到人的进化过程序列的高度保守性,我们认为还有另外两种可能性需要进一步考虑和研究:第一,Rnf151的功能在其被敲除后由其他类似的E3连接酶所替代;第二,该基因的敲除表型可能在特殊条件下才能观察到。
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