本论文主要围绕宫颈癌蛋白疫苗和肿瘤SP细胞方面开展研究。　　宫颈癌(cervical cancer，CC)是全世界女性易患的第二大癌症。研究表明人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染是产生宫颈癌的最主要因素。E6和E7是HPV相关的两类重要的癌蛋白，对于病毒的进入和细胞转化非常重要，在多数HPV相关的肿瘤中均有表达。目前重组载体疫苗、核酸疫苗、多肽疫苗及蛋白疫苗等均以E6和/或E7作为靶标。由于蛋白质疫苗既不受人类白细胞抗原(human leucocyte antigen，HLA)限制性，又避免了病毒载体或DNA疫苗潜在的安全隐患，是目前公认最安全、有效的疫苗。　　在宫颈癌蛋白疫苗研究中，我们采用了小鼠宫颈癌模型-TC-1细胞模型，探讨了HPV16 E6、E7相关蛋白诱导肿瘤细胞特异性免疫反应，抑制TC-1细胞在体内的生长情况，具备潜在的临床应用价值。　　从人宫颈癌细胞中克隆、构建HPV16 E6、E7原核表达质粒，通过拼接PCR获得了mE7序列，并构建其原核表达质粒，与E7基因不同的是mE7序列第70位碱基突变(T→G)，并去除E7基因终止密码子之前的15bp，以避免E7蛋白的转化活性，使疫苗更安全。将三种重组质粒转入大肠杆菌Rosetta中进行诱导表达，采用镍柱纯化回收E6、E7和mE7蛋白，SDS-PAGE和Western blot鉴定表达的蛋白。在肿瘤预防实验中，分别将纯化的E6、E7和mE7蛋白与全弗氏佐剂一起免疫雌性C57BL/6小鼠，结果表明，E7和mE7蛋白免疫的小鼠在接种1×105 TC-1细胞后100％避免了肿瘤发生，而对照组小鼠则全部形成肿瘤，与对照组相比较，只有17％ E6蛋白免疫的小鼠没有瘤体生长，其生存率也无显著差异，但是肿瘤生长明显减慢，说明E6蛋白也能抑制肿瘤细胞的生长。在肿瘤治疗实验中，TC-1细胞植瘤10d后用E6、E7和mE7蛋白免疫荷瘤小鼠，结果表明治疗效果不明显。为了进一步地改善肿瘤的治疗效果，研究细胞免疫和体液免疫在抑制肿瘤方面的作用，我们进行了过继免疫实验，小鼠TC-1植瘤10d后，尾静脉注射E7蛋白免疫小鼠的T细胞和血清，结果显示，与对照组相比，T细胞可以抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，而血清则未引起显著差异。CTL实验结果表明E7蛋白免疫小鼠的T细胞有裂解TC-1细胞的能力。以上结果说明了E6、E7和新型的mE7蛋白免疫小鼠能够诱导抗肿瘤的保护性免疫，并且细胞免疫在抗肿瘤反应中起着主要作用。　　HPV16 E6、E7与结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis，MTB) HSP70的融合蛋白E6-E7-HSP70能够引起小鼠抵抗肿瘤细胞的功能，但是异源MTB-HSP70蛋白可能引起小鼠及人体的免疫反应。我们克隆、构建了小鼠自体的HSP70基因以及E7-HSP70融合基因的原核表达载体，转入大肠杆菌Rosetta中诱导表达蛋白，制备包涵体蛋白，并进行了复性，得到可溶的HSP70和E7-HSP70蛋白，免疫雌性C57BL/6小鼠，在没有佐剂的情况下，E7-HSP70蛋白免疫的小鼠在接种了1×105 TC-1细胞后均没有瘤体生长，而对照组HSP70蛋白免疫小鼠则全部形成肿瘤。首次证实，在无需佐剂的情况下，E7与小鼠自体HSP融合蛋白疫苗免疫C57BL/6小鼠，可以对表达E7蛋白的TC-1细胞有抵抗作用。　　肿瘤干细胞(tumor stem cell，TSC)是肿瘤组织中存在的极少量充当干细胞角色的肿瘤细胞，具有无限增生的潜能，在启动肿瘤形成和生长中起着决定性的作用。侧群(side population，SP)细胞是肿瘤组织或细胞中具有TSC性质的一群细胞。在肿瘤SP细胞研究中，我们通过分离小鼠骨髓(bone marrow，BM)细胞，检测其SP细胞含量，确定相应的实验方法，进一步检测并证实几种未经报道的肿瘤细胞系LLC(F0)、PC-12、CaSki和SiHa中含有SP细胞，而来源于LLC(F0)的LLC(F3)细胞中的SP含量明显升高，动物实验的结果表明在原位瘤和转移瘤模型中，LLC(F3)具有更高的转移性能，首次报道小鼠肿瘤细胞LLC中SP细胞含量高可以促进肿瘤的转移。