荞麦愈伤组织培养及其黄酮合成研究

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荞麦既是我国高寒山区人们重要的粮食作物,又具有良好的保健功效。近些年药学研究表明,荞麦富含的黄酮类化合物具有SOD的功能,能清除自由基;能预防脑出血和贫血;对控制和治疗高血压症有积极作用;对降血糖,降血脂效果明显;对肿瘤细胞生长有一定的抑制作用。随着荞麦这些药用价值日益得到人们的广泛认同,如何提高荞麦药用成份成为人们研究的重要方向。黄酮类化合物是植物在长期自然选择过程中产生的一类次生代谢产物。近些年随着全球生物资源环境日益恶化,市场对这些具有生物活性的物质的需求却越来越大,细胞培养技术成为大量生产次生代谢产物的新途径。目前荞麦黄酮研究工作主要集中在根、茎、叶和籽粒中,因此荞麦愈伤组织黄酮研究为荞麦黄酮研究开辟了一个新的思路。在获得高愈伤组织生物量的前提下,又兼顾提高愈伤组织中黄酮含量,最终实现愈伤组织生物量和黄酮含量的同步增长,是黄酮类化合物生产过程中的技术关键。本文以荞麦无菌苗胚轴作为外植体诱导愈伤组织,研究了光照、蔗糖、L-苯丙氨酸和植物激素(2,4-D、NAA、6-BA)等因素对荞麦愈伤组织生长及其黄酮合成的影响,对不同基因型荞麦的愈伤组织生长及其黄酮积累进行了比较,旨在探索荞麦愈伤组织生长及黄酮合成的最佳培养条件,为选育高黄酮愈伤系的组织培养专用型品种提供参考,为荞麦大规模细胞培养和工业化生产黄酮类化合物奠定基础。本文得出的主要结论如下:(1)不同光照处理对愈伤组织的生长没有明显影响;但不同光照处理下愈伤组织黄酮的含量和产量有显著差异,光照处理明显促进黄酮的合成,尤其在黑暗/光照(16h/8h)交替处理下,愈伤组织中黄酮的含量和产量几乎是黑暗(24h)处理下的2倍。(2)随着蔗糖质量浓度升高,愈伤组织生物量、黄酮含量和产量都随之增长,蔗糖质量浓度为4%时,愈伤组织生物量、黄酮含量和产量均达到最高值,增加蔗糖质量浓度至5%,三者都略有下降。(3)随着外源L-苯丙氨酸浓度升高,愈伤组织生物量下降,但愈伤组织黄酮含量和产量增加,L-苯丙氨酸对愈伤组织的生长有抑制作用,对黄酮的合成有促进作用。(4)在低浓度范围内,随着植物激素浓度增加,对愈伤组织生长和黄酮合成的促进作用越来越明显,但浓度增加到一定值时就抑制愈伤组织生长和黄酮合成;植物激素对愈伤组织生长和黄酮合成的作用大小为2,4-D>6-BA>NAA;低浓度下2,4-D和NAA、6-BA激素配比,对愈伤组织生长和黄酮合成的促进效果更佳;促进荞麦愈伤组织生长和黄酮积累最佳的激素配比组合为1.5m/L2,4-D+0.6m/L6-BA。(5)不同基因型荞麦的愈伤组织生物量、黄酮含量和黄酮产量差异均达到极显著水平。甜荞品种(北早生、定甜荞1号、西农9976和西农9978)愈伤组织生物量平均值明显高于苦荞品种(九江苦荞、西农9940、西农9909和西农9920);苦荞品种愈伤组织黄酮含量平均值要高于甜荞品种;甜荞品种愈伤组织黄酮产量平均值要高于苦荞品种。定甜荞1号愈伤组织生物量、黄酮含量和黄酮产量在甜荞4个品种中都最高;西农9940愈伤组织生物量、黄酮含量和黄酮产量在苦荞4个品种中都最高;但西农9940黄酮含量要高于定甜荞1号,而定甜荞1号愈伤组织生物量和黄酮产量明显高于西农9940。
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