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目的 血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)异常增生是许多心血管疾病的重要发病因素,抑制VSMCs异常增生对心血管疾病的防治具有重要意义。体外试验证实人参炔醇(panaxynol)能抑制血管收缩、降低血压、抗血栓形成及抗动脉粥样硬化,但对VSMCs增殖的影响尚无报道。本实验旨在明确panaxynol对血清诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞(rat aortic smooth muscle cell, RASMCs)增殖的影响及可能的途径。方法 RASMCs原代培养,5~15代RASMCs用于实验,按0.1~1×105个细胞/孔接种于培养板,以含0.5 %FBS的DMEM培养液培养48h使细胞同步化。实验中细胞分成如下几个处理组:①正常对照组:含10%FBS的培养液;②溶剂对照组:0.1%DMSO;③药物处理组:panaxynol 1、3、9×10-6 mol·L-1组。1、细胞计数及倍增时间测定:于接种并同步化后处理0、24、48、72h,用血细胞计数板计算活细胞数量,绘制生长曲线并计算细胞倍增时间。细胞活力通过苔盼蓝拒染实验测定。2、MTT(Methyl Thiazolyl Tetrazolium,四甲基偶氮唑蓝)比色法测定RASMCs线粒体琥珀酸脱氢酶(Succinate Dehydrogenase SDH)活性:实验分组同上,同步化并处理72h后用酶联免疫测定仪测定各组吸光值。3、氚标胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-thymidine,3H-TdR)掺入法测定细胞DNA3H-TdR含量:分组及同步化同上,处理72h后用多头细胞收集仪收集细胞,用液闪仪测定各孔的分钟放射脉冲数(CPM)。4、比色法测定上清液乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)活性:分组同上,处理72h后测定上清液吸光值,计算LDH活性。5、流式细胞术实验测定RASMCs周期的变化:分组及同步化同前,处理72h后测定单一细胞DNA含量(通过掺入的碘化丙啶的荧光强度反映),并计算细胞增殖率。结果 1、与正常对照组相比,panaxynol显著降低RASMCs细胞计数值 (3×10-6 mol·L-1,9×10-6 mol·L-1, P<0.05~0.01),呈浓度依赖性(r=-0.938, P<0.05),倍增时间显著延长(3×10-6 mol·L-1,9×10-6 mol·L-1, P<0.05~0.01),提示panaxynol<WP=5>对血清刺激RASMCs增殖有明显的抑制作用。苔盼蓝拒染实验中,各组均未发现死亡细胞。DMSO组与正常对照组无显著差异。2、与正常对照组相比,不同浓度panaxynol作用72h后,吸光值显著降低(3×10-6 mol·L-1,9×10-6 mol·L-1, P<0.05~0.01),提示panaxynol显著降低RASMCs线粒体SDH活性。3、panaxynol不同浓度组使CPM显著降低(P<0.01),提示panaxynol显著抑制RASMCs 3H-TdR掺入及DNA合成。4、不同浓度panaxynol处理后,上清液LDH活性不变或略降低,各组间无统计学差异。5、流式细胞术实验结果显示, 不同浓度panaxynol处理后, G0/G1期细胞比例升高(9×10-6 mol·L-1,P<0.05),G2/M期细胞比例降低 (3×10-6 mol·L-1,9×10-6 mol·L-1, P<0.01),RASMCs增殖率显著降低(3×10-6 mol·L-1,9×10-6 mol·L-1, P<0.05~0.01),各组均未见凋亡峰。结论 Panaxynol对血清刺激RASMCs增殖有明显的抑制作用,具剂量依赖性。其机制可能与抑制线粒体功能、影响细胞代谢有关。