背景:由于二代测序技术的发展和测序成本的降低,人们对于人体微生物组有了更为深刻的认识。人体微生物组包括肠道微生物组,阴道微生物组,口腔微生物组以及气道微生物组等。其中肠道微生物组组成最为复杂,多样性最高,且已报道与人体多种疾病有着密切关系。相较于肠道微生物组,阴道微生物组组成简单。目前认为正常女性微生物组是以阴道乳酸杆菌为主要优势菌,伴随其他厌氧菌共存的微生态结构;阴道微生态失调是指阴道中乳酸杆菌丰度下降,而其他厌氧菌(如加德纳菌、普雷沃菌、阴道阿托波菌等)过度增殖的现象。现有研究表明,阴道菌群紊乱与早产、HIV、HPV、宫颈癌以及其他常见的性传播疾病的发生发展相关。临床上,阴道微生态失调常表现为细菌性阴道病,部分伴随一系列生殖道体征如瘙痒,疼痛,灼热等,而这些体征和阴道菌群改变之间具体关联仍不明确,有待进一步的研究。在本研究中,我们也比较了不同的核酸提取方法,尝试明确一种更为高效、简单的实验方法,以期优化阴道微生物组研究样本前处理。同时,通过分离培养技术获得更多的阴道细菌并确定其分类和功能也是人体微生物组研究的重要组成部分。研究目的:1、探究不同核酸提取方法在阴道微生物组研究中的作用,优化实验流程;2、探究阴道微生态失调女性阴道菌群和不同临床体征的关联;3、初步探究阴道微生物培养条件和阴道可培养细菌基本组成。方法:首先我们选择了四种核酸提取方法,分别为磁珠破碎方法,离子柱层析法、磁珠离子柱层析法和直接煮沸法,对不同疾病的阴道分泌物进行了核酸提取,从PCR扩增效率、菌群构成等方面进行比较分析。同时,我们在珠江医院妇科门诊募集一批阴道明显不适,临床诊断为阴道炎,排除生殖道明确病原体感染的女性。采用调查问卷收集了包括瘙痒、灼痛、性交痛、性交出血等临床体征信息;每个女性分别采集2份阴道拭子,进行了 Nugent Score和16S rRNA测序分析、白带常规和阴道炎酶学检测。结果:结果显示,直接煮沸法的菌群组成结构与其他三种方法结果较为接近,可以真实地反映阴道菌群组成;但存在部分样本核酸浓度较低现象,需要进一步优化改进以提高部分低生物量的样本提取效率。结果显示:不同临床体征与阴道微生物组分型存在相关;尿痛或腰痛体征在CST4菌型比CST3菌型有更高的比例;而宫颈肥大在CST4女性群体相较于CST3和CST2女性有着更高的阳性率,研究提示CST4菌型与女性阴道临床体征相关,在临床的治疗和后续研究中应引起更多的关注。后期,我们初步探索和建立针对阴道细菌分离培养的条件体系,目前共分离得到112株阴道细菌菌株,包括大量报道的潜在阴道益生菌Lactobacillus cripatus 9株;与多种疾病相关的 Prevotella spp.2 株,Gardnerella vaginalis3株,以及目前仍存在较大争议的Lactobacillus iners3株;该部分工作为进一步的微生物致病机制研究提供重要的基础。结论:基于测序技术的阴道微生物组学研究对女性生殖道相关的疾病提供了更深的认识,在研究中发现,阴道菌群紊乱女性的临床体征与阴道微生物组聚类型别相关。以乳杆菌和阴道加德纳菌以外的细菌为阴道优势菌的CST4型菌群紊乱相较于以阴道加德纳菌为优势菌的CST3型菌群紊乱更具临床意义,提示后续临床更应该关注此类病人诊断、治疗和研究。其次,阴道微生物的成功分离培养仍是下一步阴道菌群和女性生殖道疾病致病机制研究的重要基础,值得更一步探索。