论文部分内容阅读
目的:应用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰乳腺癌MCF-7细胞的c-myc表达,了解c-myc对MCF-7细胞增殖和凋亡的作用,以及c-myc及其靶基因的变化,以寻找有效的基因治疗手段。方法:将c-myc siRNA,经LipofectamineTM2000脂质体转染MCF-7细胞后,流式细胞仪检测转染效率,实时定量PCR检测c-myc mRNA转录的变化,Western Blotting法检测c-myc蛋白表达的变化,MTT法检测干扰后MCF-7细胞增殖的变化,流式细胞仪检测干扰后MCF-7细胞凋亡的变化。多重PCR检测c-myc及其靶基因的变化。结果:(1)转染6小时后,转染效率高达98.1±0.003%。(2)转染后c-myc的mRNA表达明显减弱,24小时干扰效率达到50±0.028%,到48小时减弱更加明显,干扰效率达到85±0.042%。(3)c-myc蛋白表达明显降低,在转染24小时后,蛋白表达降低,干扰效率达到52%,48小时后表达进一步降低,干扰效率达93%。(4)转染24小时后细胞增殖能力开始下降,48和72小时后细胞增殖能力明显受抑,抑制率分别为23.6%和35.6%。(5)转染后24小时后,细胞可见部分凋亡,凋亡率为28.85±0.65%,48小时后凋亡增加到51.2±0.52%,72小时后凋亡率可以达到80.8±1.32%,明显高于对照组(P均<0.05)。(6)转染48小时后c-myc基因表达下降的同时,其靶基因DHFR,hTERT,ODC,cdc25a,cad,HMG-I/Y,C/EBPa,p53,cyclinD1,cyclinD2表达也明显降低。结论:(1)LipofectamineTM2000脂质体介导c-myc siRNA导入MCF-7细胞具有转染率高、方法简便等特点。(2)运用RNAi技术,可以有效地干扰MCF-7细胞中c-myc的表达,抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡。(3)SiRNA干扰c-myc表达后,c-myc的靶基因DHFR,hTERT,ODC,cdc25a,cad,HMG-I/Y,C/EBPa,p53,cyclinD1,cyclinD2的表达亦有相应降低。