为了探究不同pK_a的药物经口服给药后与消化道不同部位消化酶的化学作用,本文选取两种具有不同pK_a的药物乙酰唑胺(ACZ,pK_a 7.2)和氨苯砜(DDS,pK_a 2.4)作为模型药物,使用多光谱法结合分子对接技术研究在消化道不同生理pH值条件下两种药物对胃蛋白酶和胰蛋白酶的酶学性质及构象的影响。主要内容包括:(1)ACZ在肠道pH 6.8条件下对胰蛋白酶活性的抑制作用大于在胃pH 2.0条件下对胃蛋白酶的抑制。酶动力学结果显示ACZ对胃蛋白酶为非竞争性抑制,对胰蛋白酶为竞争性抑制,K_i值分别为74.8μM/L和19.0μM/L。光谱法分析表明ACZ与胰蛋白酶的结合力大于胃蛋白酶。ACZ与胃蛋白酶的结合作用力为氢键和范德华力,与胰蛋白酶结合作用力主要为静电力。此外,ACZ对胰蛋白酶的蛋白二级、三级构象影响大于胃蛋白酶。(2)DDS在胃pH 2.0条件下对胃蛋白酶活性的抑制大于在肠道pH 6.8条件下对胰蛋白酶的抑制。DDS对胃蛋白酶为竞争性和非竞争性结合的混合型抑制,对胰蛋白酶为非竞争性抑制,K_i值分别为15.4μM/L和64.2μM/L。光谱法分析表明DDS与胃蛋白酶的结合力大于胰蛋白酶。DDS与胃蛋白酶的结合作用力主要为静电力,与胰蛋白酶结合作用力为氢键和范德华力。另外,DDS对胃蛋白酶二级、三级构象的影响大于胰蛋白酶。(3)利用Autodock软件模拟了两种电荷状态下ACZ和DDS与胃蛋白酶和胰蛋白酶相互作用,模拟结果说明药物分子不同的电荷状态将导致药物与蛋白酶结合位点及结合作用力的差异,分子对接模拟结果支持上述实验结果。以上结果表明,不同pK_a的药物在不同生理pH下所形成的不同离子状态对该生理条件下的消化酶会产生不同的化学作用。该结果对临床用药及制剂开发具有重要的指导意义。