【摘 要】
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目的:探讨小剂量百草枯（paraquat,PQ）所致的肺上皮细胞间质纤维化过程中,Notch细胞信号传导通路中关键信号分子的改变。研究方法:制备可表达NICD蛋白的慢病毒载体pCDH-nicd用于感染A549细胞,A549细胞株培养稳定后随机分为4组,A.对照组（细胞不做任何处理）、B.PQ组（细胞仅给予百草枯）、C.pCDH-nicd处理组（A549细胞感染慢病毒pCDH-nicd）、D.PQ加
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（No.81301627）；
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目的:探讨小剂量百草枯（paraquat,PQ）所致的肺上皮细胞间质纤维化过程中,Notch细胞信号传导通路中关键信号分子的改变。研究方法:制备可表达NICD蛋白的慢病毒载体pCDH-nicd用于感染A549细胞,A549细胞株培养稳定后随机分为4组,A.对照组（细胞不做任何处理）、B.PQ组（细胞仅给予百草枯）、C.pCDH-nicd处理组（A549细胞感染慢病毒pCDH-nicd）、D.PQ加pCDH-nicd处理组（A549细胞感染慢病毒pCDH-nicd加PQ共同处理）。通过相差显微镜观察细胞形态变化,MTT法分别测细胞存活率,收集细胞以Western-Blot检测Notch通路下游关键信号分子E-cadherin及α-SMA的蛋白表达水平。多组间的差异采用单因素方差分析,以P＜0.05为差异有统计学意义。结果:以慢病毒pCDH-nicd转染A549细胞后,NICD蛋白表达量明显上升。相差显微镜观察显示A组细胞呈梭型,有少许凋亡细胞;B组细胞由梭形变为不规则形,细胞的存活率明显降低;C组与B组细胞形态变化相似;D组细胞形态与B、C俩组相似,但细胞存活率较B、C两组减低明显,更显著低于A组。Western-Blot检测结果表明,与A组相比,B组及C组E-cadherin蛋白表达量下降（P＜0.05）,D组与B、C两组相比E-cadherin蛋白表达量进一步下降（P＜0.05）,且B、C两组之间无差异（P＞0.05）;与A组相比,B组及C组α-SMA蛋白表达量上升（P＜0.05）,D组与B、C两组相比α-SMA蛋白表达量进一步上升（P＜0.05）,且B、C两组之间无差异（P＞0.05）。结论:PQ慢性染毒和上调A549细胞中NICD的表达水平,都可导致A549细胞形态发生明显EMT化,并引起NOTCH通路下游关键信号分子E-cadherin及α-SMA的蛋白表达水平发生改变,且两者具有协同促A549发生EMT化的作用,表明Notch信号通路参与了PQ诱导的肺上皮细胞EMT的过程。
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