Pseudomonas fragi A22抗逆性的研究及其脂多糖的结构解析

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Pseudomonas fragi A22是由本实验室从北冰洋海岸分离到的一株革兰氏阴性耐冷菌,是继Pseudomonas fragi B25后发现的第二株莓实假单胞菌,具有一定的抗逆性,能在低温下(4℃)快速生长,与其同属的P.fragi B25相比具有更强的抗冻融能力和抗饥饿能力。因此,研究P.fragi A22的抗逆性及相关代谢调控机理为探究生物适应极端环境机理奠定理论基础。据报道脂多糖即是细胞外膜外侧主要成分更是细菌抗逆机制的原因之一,但目前还没有关于莓实假单胞菌脂多糖结构及莓实假单胞菌相关基因的报道。因此本文通过解析P.fragi A22的脂多糖的组成及类脂A的结构并对其基因组测序分析探究莓实假单胞菌的抗逆机制。首先采用EDTA抽提法从P.fragi A22菌株中提取并纯化出脂多糖,测定了脂多糖的在菌体内的积累量,然后用弱酸水解的方法将类脂A从脂多糖中分离出来,并通过核磁共振、GC-MS和红外光谱等手段进行定性和定量分析,鉴定了P.fragiA22的类脂A的结构包括两个通过β-1,4键连接的葡萄糖胺及四种脂肪酸分别是C16:0, C18:0,10-keto-C18:0、△17-C18:1。通过碱解的方法从脂多糖样品中分离出单糖,用高效液相色谱及气相色谱法测得P.fragi A22的脂多糖的糖类组成中含有鼠李糖和葡萄糖胺。通过研究发现P.fragi A22为了适应极端环境,在体内产生一系列的抗逆机制,一是在细胞外膜中含有较多的脂多糖,P. fragi A22的细胞外膜中含有比与其同属的P. fragiB25的脂多糖多9倍。二是通过解析其脂多糖结构,发现在P. fragi A22的类脂A中含有不饱和脂肪酸油酸,以降低膜的相变温度,可能是适应低温环境的原因之一,这是迄今为止发现的一种新型类脂A结构。
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