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目的:本研究用一种杂交瘤皿,根据内皮祖细胞集落形成单位(endothelial progenitor cells colony-forming units,EPCs-CFUs)的形态特征和EPCs表面特异性标记物分离EPCs。方法:取大鼠股骨、胫骨骨髓,将全骨髓接种在聚苯乙烯材料的杂交瘤皿上,培养4-7天后出现干细胞集落单位(stem cells colony-forming units),在显微镜下将这些集落分别挑选出来后,取单个集落的一部分细胞,免疫荧光鉴定EPCs表面特异性标记物CD133/VEGFR-2。CD133/VEGFR-2双阳性即为EPCs-CFU。另一部分继续传代增殖,流式细胞术鉴定CD133/VEGFR-2/CD34。并把此方法定义为微孔法。结果:全骨髓接种后第4天,显微镜下可见明显的CFUs。免疫荧光鉴定7.33±2.51%(n=5)的CFUs为CD133+/VEGFR-2+ EPCs-CFUs,进一步传代培养,流式细胞术鉴定CD133/VEGFR-2双阳性率为73.28±7.43%, CD34/CD133双阳性率为70.36±10.17% (n=3)。传代细胞可在体外形成血管样结构,并分化出内皮细胞特异性标记物vWF。结论:通过微孔法成功地从大鼠骨髓分离到内皮祖细胞。目的:观察基质细胞衍生因子-1α(stromal cell-derived factor-1α,SDF-1α)对体外培养的大鼠骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)增殖、迁移、黏附、细胞集落单位生长及血管样结构形成等生物学活性的影响,并初步探讨其作用机制。方法:微孔法从大鼠骨髓提取CD133+/VEGFR-2+/CD34+ EPCs。不同浓度SDF-1α处理EPCs后,采用MTT、transwell迁移系统、黏附实验、细胞克隆实验等检测EPCs细胞增殖、迁移、黏附、细胞克隆生长以及血管样结构形成;采用氧化低密度脂蛋白诱导EPCs凋亡,Hoechst 33258染色和流式细胞术检测SDF-1α对EPCs凋亡率的影响。RT-PCR和Western blot检测CXCR4 mRNA和蛋白表达水平。结果: SDF-1α浓度依赖性促进EPCs增殖、迁移和黏附、显著增强EPCs克隆形成和血管样结构形成,对照组与SDF-α各处理组比较差异均具显著性(n=3,P<0.05或P<0.01)。SDF-1α显著降低EPCs凋亡率,使凋亡率由Ox-LDL处理组的22.1±1.80%下降到Ox-LDL与SDF-1α共处理组的13.37±1.464%(n=3,P<0.01)。SDF-1α浓度依赖性上调CXCR4 mRNA和蛋白表达,其中100μg/L SDF-1α处理组CXCR4蛋白表达量与对照组比较上调2.6倍。结论: SDF-1α促大鼠骨髓源EPCs增殖、迁移、黏附、克隆生长及血管样结构形成,SDF-1α抑制Ox-LDL致EPCs凋亡。其生物学活性改善可能与上调CXCR4表达有关。