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食品安全问题一直都是深受世界各国领导和百姓广泛关注的民生问题之一,长期威胁着人类的健康安全。在发生的诸多食品安全事件中,由食源性病原菌引起的食源性疾病是主要因素之一。因此,对食源性病原菌的检测成为了世界各国食源性疾病监测的重中之重。为了满足食源性疾病监测中对食源性病原菌快速检测的需求,克服传统检测方法如平板培养法和酶联免疫法等存在的耗时费力、周期长或灵敏度不高等缺点,开发易于操作、灵敏便捷的新型检测方法,对于预防食源性疾病的发生至关重要。糖肽类抗生素（Glycopeptides antibiotics,GPAs）与革兰氏阳性细菌的细胞壁具有强亲和力,不仅可以用于治疗革兰氏阳性菌的感染,还能作为检测革兰氏阳性菌的识别分子。同为识别分子的特异性较高的抗体、噬菌体等虽在食源性病原菌的检测领域应用较为成熟,但GPAs具有易于制备和修饰,稳定性高且成本低等优点,在食源性病原菌的分离和检测中也深受研究者的喜爱。本文以GPAs替考拉宁（Teicoplanin,Teic）作为识别分子,并通过PEG和BSA“双重”介导的偶联方式修饰在羧基化磁珠表面（Magnetic beads,MBs）,用以对磷酸盐缓冲液（Phosphate buffer solution,PBS）或食品加标样中的金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）和单增李斯特菌（Listeria monocytogenes,L.monocytogenes）进行富集分离,并与免疫荧光量子点微球构建“夹心”复合物,通过检测复合物的荧光强度实现对两种目标菌的特异性检测。各章节内容分述如下:第一章:综述了GPAs在食源性病原菌检测中应用的研究进展及识别分子和磁性纳米材料的偶联方式。第二章:建立了基于“双重”介导的Teic功能化磁珠（MBs-PEG-BSA-Teic）,结合生物素化的猪Ig G修饰的量子点荧光微球（QBs-SA-Bio-Ig G,发射波长:525 nm）特异性检测S.aureus的方法。研究中首先将Teic修饰在MBs表面的偶联方式进行了优化,采用分离效率最佳的材料进行后续实验,即MBs-PEG-BSA-Teic。将MBs-PEG-BSA-Teic与S.aureus结合,借助外加磁场的作用实现对S.aureus的富集分离。在最佳条件下,该材料对PBS中菌浓度为3.3×10~1-3.3×10~6CFU/m L的S.aureus的分离效率高于89.34%,对该浓度范围内牛肉实际加标样中的S.aureus的分离效率也高于75.62%。该方法以Teic作为S.aureus的识别分子,且采用“双重”介导的偶联方式,提高了对目标菌的分离效率,降低了材料用量,节约了成本,采用QBs-SA-Bio-Ig G作为信号输出分子,实现了对S.aureus的灵敏检测。PBS和牛肉实际加标样中的S.aureus的检测限分别达到3.3×10~1CFU/m L和3.3×10~1CFU/g。该研究证实了Teic对S.aureus具有识别能力及其在磁分离技术中应用的可行性,体现了“双重”介导的偶联方式在提高反应效率、降低检测成本等方面的显著优势。第三章:建立了基于MBs-PEG-BSA-Teic结合聚乙二醇（PEG）介导L.monocytogenes抗体修饰的量子点荧光微球（QBs-PEG-Ab,发射波长:565 nm）特异性检测L.monocytogenes的方法。研究中首先将MBs-PEG-BSA-Teic与L.monocytogenes结合,借助外加磁场的作用实现对L.monocytogenes的富集分离。在最佳条件下,该材料对PBS中菌浓度在2.6×10~1-2.6×10~6CFU/m L的L.monocytogenes分离效率高于87.58%,且对该浓度范围内的牛肉实际加标样中L.monocytogenes的分离效率高于81.57%。通过MBs-PEG-BSA-Teic富集分离L.monocytogenes后,采用QBs-PEG-Ab作为信号输出分子,实现了对L.monocytogenes的灵敏检测。PBS和牛肉实际加标样中L.monocytogenes的检测限分别达到2.6×10~1CFU/m L和2.6×10~1CFU/g。该研究证实了Teic对L.monocytogenes具有识别能力,进一步表明其在磁分离技术中应用的可行性。第四章:采用MBs-PEG-BSA-Teic结合QBs-SA-Bio-Ig G和QBs-PEG-Ab同时检测S.aureus和L.monocytogenes。研究中首先将MBs-PEG-BSA-Teic与S.aureus和L.monocytogenes共结合,借助外加磁场的作用实现对S.aureus和L.monocytogenes的富集分离。在最佳条件下,该材料对PBS中菌浓度范围在3.3×10~1-3.3×10~6CFU/m L的S.aureus的分离效率高于83.33%,对菌浓度范围在2.6×10~1-2.6×10~6CFU/m L的L.monocytogenes的分离效率高于77.96%。而对果汁实际加标样中该浓度范围内的S.aureus的分离效率高于62.54%,对L.monocytogenes的分离效率高于61.17%。本研究将该方法用于多种实际加标样中S.aureus和L.monocytogenes的同时检测,结果表明该方法对PBS和果汁实际加标样中的检测限为10~1CFU/m L,对菠菜和牛肉实际加标样中的检测限为10~2CFU/g。该研究表明,所建立的方法适用于多种实际加标样中两种目标菌的同时检测,为实际加标样中其它革兰氏阳性菌的检测提供了一定的指导意义。