论文部分内容阅读
植物雄性不育是自然界普遍存在的生物学现象,在作物生产中已被广泛应用。玉米是全球重要的粮食和经济作物,近年来对玉米雄性不育的研究取得了一定的进展,但对玉米雄穗不同发育时期的分子调控机制仍不十分清楚,有待进一步探索。本文以玉米雄性不育突变体iapl(irregular anther and pollenl)为研究材料,对其败育过程、遗传方式、基因功能、可能的不育机理等进行了研究和分析。 本研究主要内容包括:⑴在玉米盛花期,相对于野生型,iapl突变体的花药瘦小、萎缩,不能产生成熟花粉粒,表现为彻底的雄性不育;但雌穗可以正常接受外来花粉并结实。⑵以iapl突变体作母本,以自交系B73、昌7-2和郑58作父本,分别杂交获得F1,其F1均表现为雄性可育;以iapl突变体作母本,以3个F1作父本,分别杂交获得相应的BC1F1,3个BC1F1群体中,可育个体与不育个体的分离比例都为1:1,表明iapl突变体雄性不育性状是由隐性单基因控制。⑶利用树脂半薄切片、扫描电镜和透射电镜技术,对野生型和iapl突变体不同发育时期的花药进行形态学和细胞学观察,结果表明,iapl突变体花粉母细胞可以正常进行减数分裂产生小孢子,但绒毡层细胞发育异常,致使小孢子从四分体中释放后未能继续发育而逐渐解体,最终导致雄性不育。iapl基因突变影响花药减数分裂后期绒毡层降解和小孢子发育的过程。⑷利用3个BC1F1分离群体的8896个单株,将iapl基因精细定位在1号染色体的短臂上;通过遗传转化互补实验和CRISPR-Cas9系统对iAPl的敲除实验,验证了iAPl基因的功能。iAPl含有三个外显子,编码一个含有582个氨基酸残基的葡萄糖.甲醇.胆碱(GMC)氧化还原酶,是氧化还原酶家族的一个成员,推测参与花药发育过程中脂肪酸代谢过程:iapl突变体雄性不育是由iAPl基因的第三外显子上一个hAT转座子插入造成的。⑸荧光定量PCR和原位杂交结果表明,iAPl主要在花药发育四分体形成后期绒毡层和小孢子中特异表达;亚细胞定位结果表明,iAPl蛋白主要在细胞内质网行使其生物学功能。⑹对野生型和突变体花药的代谢组比较分析,发现在成熟期突变体花药单位表面积蜡质含量高于野生型,单位表面积角含量明显低于野生型,而单位质量花药的总脂肪酸含量要低于野生型。推测,L4Pl基因可能参与了花药发育过程中脂类代谢的调控。⑺对野生型和突变体花药的转录组比较分析,初步鉴定出在花药发育过程中与iAPl相关的差异表达基因。