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目的:
研究发育期的轴突导向分子Ephrin-A5在成年大鼠缺血性脑梗死皮层内的分布、梗塞灶周围不同时点表达的变化及电针刺激干预对其表达变化的影响,探讨电针刺激治疗能否通过调控神经生长抑制因子Eptlrin-A5的表达这一途径对缺血性脑梗死后的神经功能康复起到一定作用。
方法:
将90只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、刺激组,每组30只。将模型组、刺激组的SD大鼠右侧大脑中动脉皮层支闭塞建立缺血性脑梗死(middle cerebralartery occlusion,MCAO)模型,假手术组不凝闭大脑中动脉。刺激组的30只SD大鼠于术后次日起于内关、外关、足三里、三阴交穴给予电针刺激治疗,采用疏密波刺激(疏波30Hz,密波100Hz),强度6~12V,以肢体相应部位出现轻微颤动为准。每天1次,每次30分钟,连续治疗6天,第7天暂停。采用免疫组化技术检测Ephrin-A5的分布及细胞定位,在MCAO术后1、2、4周检测梗塞灶周Ephrin-A5表达的荧光灰度值,并结合荧光定量PCR技术检测Ephrin-A5mRNA的表达量。
结果:
一.脑梗死后Ephrin-A5的分布
大鼠大脑皮层的V2MM(第二视皮质,内侧内区)、V2ML(第二视皮质,内侧外区)、V2L(第二视皮质,外侧区)、Aul(第一听皮质)、AuV(第二听皮质,腹侧区)及海马区域Ephrin-A5表达较强,其主要分布在皮层的Ⅱ(外颗粒)层、Ⅲ(外锥体细胞)层、Ⅳ(内颗粒)层及Ⅴ(内锥体细胞)层中的锥体细胞、颗粒细胞中。梗死灶侧Ephrin-A5阳性信号较非梗死灶侧强。
二.各组大鼠Ephrin-A5的表达
术后第1、2、4周刺激组的荧光灰度值分别为170.85±47.11、99.64±18.03、51.27±12.79;模型组为87.36±30.24、76.47±19.67、85.74±25.80;假手术组为27.69±12.44、22.93±21.36、24.48±18.61。刺激组1、2周表达均最高,4周时低于模型组,差异具有统计学意义(p<0.05);模型组4周时表达最高,1、2周低于刺激组,但高于假手术组,差异具有统计学意义(p<0.05):模型组1周至4周表达无变化处于持续高水平,假手术组持续低水平表达,差异无统计学意义(p>0.05)。
三、各组大鼠Ephrin-A5 mRNA的表达
术后第1、2、4周刺激组的Ephrin-A5的相对值(Ephrin-A5的拷贝数/GAPDH的拷贝数)分别为106.23±52.82、45.52±15.10、10。59±1.93;模型组为19.36±4.24、20.62±5.41、17.23±4.39;假手术组为6.89±1.34、6.34±1.28、5.18±1.09。刺激组1、2周表达均最高,4周时低于模型组,差异具有统计学意义(p<0.05);模型组4周时表达最高,1、2周低于刺激组,但高于假手术组,差异具有统计学意义(p<0.05);模型组1周至4周表达无变化处于持续高水平,差异无统计学意义(p>0.05);假手术组各周持续低水平表达,差异无统计学意义(p>0.05)。
四、术后大鼠肢体功能评分
平衡木试验<[5]>评分结果:大脑中动脉闭塞术后第1周刺激组肢体功能较模型组差,评分差异有统计学意义(P<0.05);术后第2周刺激组肢体功能较模型组好,评分差异有统计学意义(P<0.05);术后第4周刺激组与模型组评分差异无统计学意义(P>0.05)。刺激组及模型组术后2周评分较各组第1周评分差异有统计学差异(P<0.05),但4周较2周的评分各组均无统计学差异(P>0.05)。
结论:
1.MCAO促使梗死灶周围脑组织Ephrin-A5表达增加,较无脑梗死的对照组高,并且表达高峰从1周持续至4周。说明它参与了脑梗死后病理生理变化过程。
2.电针刺激干预影响了脑梗死后神经生长抑制因子Ephrin-A5的表达。电针刺激治疗可能通过调控Ephrin-A5因子的变化这一途径影响了脑梗死后的肢体功能的康复过程。