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本研究通过在pCAMBIA1301的多克隆位点引入两套RNAi单元，构建了构建了包含相向CaMV35S启动子两套RNAi载体。一个RNAi单元是在相向的CaMV35S启动子之间插入gus基因片段，该片段两端带有SapI的酶切位点，基因组DNA在用Sau3AI酶切后，在粘性末端补加一个T就可以和SapI的粘性末端互补，从而把基因组DNA片段克隆到双向启动子之间，转入植物表达得到相应的dsRNA，实现RNA干扰作用；另一套的RNAi单元在是相向的CaMV35S启动子之间插入gfp基因片段，该片段两端带有Bsu36I的酶切位点，可将经RT-PCR得到的cDNA在dTTP的保护下，用T4DNApolymerase处理后通过Bsu36I克隆到相向启动子之间，转入植物表达得到相应的dsRNA；本研究先通过农杆菌LBA4404介导的感染将gus基因和gfP基因转入烟草，经过潮霉素抗性筛选，得到能表达gus基因和gfp基因的烟草。RNAi载体，pCAMBIA1301-gfp-GUSi-NPTII,它是以NPTII作为标记基因，以gfp为报告基因。然后将该载体通过农杆菌介导的感染表达gus基因的烟草。另一个RNAi载体，pCAMBIA1301-GUS-GFPi-NPTII，以NPTII作为标记基因，以GUS为报告基因。通过卡那抗性筛选、GUS活性鉴定以及Nouthernblot鉴定转化植株以及gus基因表达是否被干扰和被干扰表达的程度。