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自然调节性T细胞(natural regulatory T cells, nTregs)调节生理及病理情况下机体的免疫应答,对于维持机体自身免疫耐受及免疫自稳具有重要作用。Foxp3在nTregs中高表达,是nTregs发生、发育及功能发挥必不可少的关键转录因子。同时Foxp3与其他T细胞如Th1、 Th17等的关键转录因子相互作用,与它们的分化发育存在密切的相关性,参与了临床各种免疫疾病的病理过程。HIV-Tat蛋白转导结构域(protein transduction domains, PTD)能将外源性的生物分子带入细胞内,甚至核内,但对细胞无毒副作用,已广泛地应用于基础研究中,是生物医药重要的给药载体,为生命科学研究领域提供了新的工具。目的：研究PTD-Foxp3融合蛋白的生物学功能,观察其对Tregs、Th17、Th1等亚群分化的调节作用及对免疫相关性疾病的治疗作用,为最终应用于临床器官移植及自身免疫病等免疫相关性疾病的治疗提供理论和实验室依据。方法：(1)人淋巴瘤细胞系Jurkat或从外周血分离人PBMCs和CD4+CD25-T细胞,经融合蛋白PTD-人FOXP3(PTD-hFOXP3)处理后,分别采用CCK-8法检测(?)JCD4+CD25-T细胞活化增殖能力及蛋白转导的CD4+CD25T细胞对效应细胞的增殖抑制能力：RT-PCR检测IL-2、INF-γ、IL-10、IL-4、TGF-β和CTLA-4的mRNA表达水平；ELISA测定上清中IL-2、INF-γ、IL-10和TGF-β的分泌水平及流式细胞术检测CD25和CTLA-4蛋白水平的表达；同时用CCK-8法检测(?)JPTD-hFOXP3对双向混合淋巴细胞反应(MLR)的抑制作用；最后采用染色质免疫共沉淀(ChIP)实验检测(?)JFOXP3在IL-2启动子区的富集情况；(2)体外观察融合蛋白PTD-小鼠Foxp3(PTD-mFoxp3)对小鼠Th1和Th17分化的调节。分离CD4+T细胞,经细胞因子诱导Th1、Thl7,加入PTD-mFoxp3处理,再采用定量PCR和流式细胞术分别检测INF-γ、T-bet、IL-17A、RORyt mRNA表达水平(?)(?)NF-γ、IL-17A(?)的蛋白表达水平变化来评价PTD-mFoxp3对这两种T细胞亚群分化的影响；(3)采用PTD-mFoxp3治疗OVA诱导的迟发性超敏反应(Delayed hypersensitivity reaction, DTH)模型小鼠局部,通过观察耳廓肿胀程度,组织切片的组织病理变化,脾细胞对OVA的应答能力,耳廓局部组织及引流淋巴结分泌INF-γ能力等指标来观察PTD-mFoxp3对Th1介导的DTH的治疗作用。结果：(1) PTD-hFOXP3能明显抑制CD4+CD25-T细胞的活化增殖,且其转导的CD4+CD25-T细胞能抑制CD3/CD28抗体活化的CD4+CD25-效应T细胞增殖;RT-PCRELISA及FCM结果表明PTD-hFOXP3明显下调IL-2与IFN-γ的表达,而上调IL-4、IL-10、TGF-β和CTLA-4的表达；PTD-hFOXP3还能抑制双向MLR; ChIP结果显示FOXP3富集于IL-2启动子区；(2)体外在重组细胞因子及CD3/CD28抗体诱导条件下,CD4+T细胞可以向Th1、Th17方向分化；在Th1极化条件下,经PTD-mFoxp3处理后,IFN-γ与T-bet mRNA表达水平明显下降,流式细胞术结果显示IFN-γ+CD4+T细胞比率也明显降低；在Th17极化条件下,PTD-mFoxp3能下调IL-17A与RORyt的mRNA表达水平及IL-17A的蛋白表达水平；(3)耳局部给予PTD-mFoxp3治疗DTH模型小鼠,可以明显减轻耳廓的肿胀程度,改善耳廓局部组织炎症情况；耳局部引流淋巴结细胞分泌IFN-γ水平降低,而Foxp3表达水平上调。结论：PTD-hFOXP3可以将CD4+CD25T细胞转化为Treg样细胞；PTD-mFoxp3抑制了CD4+T细胞体外向Th1、Th17方向分化,且可有效抑制小鼠DTH的发生发展,因止(?)PTD-hFOXP3/mFoxp3对Th1和Th17细胞亚群的分化具有负向调控作用,为最终PTD-FOXP3应用于移植排斥和自身免疫病等临床疾病的治疗提供了实验基础。