RNA干涉(RNA interference，RNAi)是指同源双链RNA所引发的特异序列的转录后基因沉默现象。它被证明是一项能有效而特异地抑制基因表达的新技术。腺相关病毒(adneo-associated virus，AAV)载体是一种有效的核酸递送载体，可将小片段DNA高效低毒的转入哺乳动物细胞。多功能转录因子CTCF(CCCTC-binding factor，CCCTC结合因子)是多锌指结构蛋白，许多报道表明其与肿瘤的发生及多个基因的调控有密切的关系。 本课题旨在利用小干涉RNA(small interfering RNA，siRNA)抑制CTCF在HeLa细胞中的表达，进而研究CTCF改变所致调控网络的整体性变化，全面揭示CTCF的功能。 本课题首先针对CTCF的mRNA设计RNAi的靶位，通过筛选确定2个靶位点。构建带有H1启动子的shRNA通用表达载体，分别针对2个靶位点构建抑制CTCF表达的病毒包装质粒，包装重组腺相关病毒。将重组病毒感染HeLa细胞后分别挑取能稳定表达shRNA的单细胞克隆，共得到29株细胞株。用实时荧光定量PCR法和Western印迹法检测细胞克隆的CTCF表达水平。结果发现在mRNA水平，以正常HeLa细胞为对照，GAPDH为内参，CTCF的表达最高可被下调76％，在蛋白水平，以正常HeLa细胞为对照，α-actinin为内参，CTCF的表达也被下调70％左右。在上述研究中，CTCF mRNA下降幅度，蛋白下降幅度与细胞生长抑制程度之间具有明显的相关性，提示CTCF正常表达对细胞生长的重要性。 同时本课题还对脂质体DC-chol／DOPE转染的方法进行了探讨，自己制备了脂质体DC-chol／DOPE，并且确定了转染实验所需的最适浓度和与转入DNA的最佳比例。利用此方法方便快速的大量制备重组腺相关病毒获得成功。 本课题为整体性的研究CTCF基因抑制后相关表达谱的改变提供了重要的实验依据和必要的技术支持。