背景:子宫内膜异位症(endometriosis,EMs,简称内异症)是多发病,近年来发病率有明显上升的趋势,其发病机制尚未完全明了,对策有限。故寻找相关病因是目前的研究热点。近年来,关于芳香化酶(P450arom)研究较多,Matsuzaki等研究发现:在EMs患者的在位和异位内膜组织中发现芳香化酶异常表达,而在正常子宫内膜细胞中却未发现芳香化酶的表达。说明P450arom在EMs的发生发展过程中起重要作用,故芳香化酶抑制剂作为一种治疗EMs的新方法受到人们关注。近年来,由于伦理学问题,很难在人体进行EMs的对照研究,尤其不可能随机进行各种类药物的干预实验和刺激,芳香化酶抑制剂在EMs中的应用研究转向细胞模型,本研究利用体外培养绌胞模型来研究芳香化酶抑制剂来曲唑。进一步证实来曲唑对EMs的治疗效果。此实验将有望为芳香化酶抑制剂治疗EMs提供理论依据。　　 目的:　　 1.通过对来曲唑作为芳香化酶抑制剂对体外培养EMs在位内膜细胞的影响探讨来曲唑在EMs治疗中的作用。　　 2.观察来曲唑对体外培养EMs在位内膜细胞产生抑制作用的最佳浓度和时间。　　 3.电镜下观察正常子宫内膜细胞与体外培养EMs在位内膜细胞形态学的差别。　　 方法:　　 1.培养子宫内膜腺上皮及间质细胞。　　 参照Ryna等的方法,略有改动。　　 2.应用免疫组化法进行细胞鉴定。①基质细胞波形蛋白染色阳性,CK19染色阴性。阳性细胞胞浆呈棕黄色,核为蓝色,阳性率为93％。②腺上皮细胞CK19染色阳性,波形蛋白染色阴性。阳性细胞胞浆呈棕黄色,核为蓝色,阳性率为90％。说明可以满足进一步实验的要求。　　 3.电镜下观察细胞形态。制备子宫内膜细胞切片,在电镜下观察正常子宫内膜细胞与EMs在位内膜细胞形态学差异。　　 4.MTT法检测不同浓度来曲唑抑制子宫内膜细胞增殖作用。将EMs在位内膜细胞随机分为五组,每组设5个复孔,分别加入不同浓度来曲唑,即1×10-10mmol/L,1×10-9mmol/L,1×10-8mmol/L,1×10-7mmol/L。以不加来曲唑组为阴性对照。分别培养24、48、72小时后,MTT处理测定各孔492nm波长吸收值,记录结果。取OD平均值绘制生长曲线。　　 5.用流式细胞仪检测细胞周期、增殖指数。将细胞以1×105/ml的密度接种于25cm2培养瓶中,24h后,用不同浓度来曲唑即1×10-10mmol/L,1×10-9mmol/L,1×10-8mmol/L,1×10-7mmol/L进行刺激,同时设立空白对照组,刺激时间为48h。达到预定时间后,收集细胞,采用PI染色流式细胞仪检测细胞周期。每种刺激条件的样本重复5次。　　 结果:　　 1.在电镜下观察细胞学形态未发现正常子宫内膜细胞与EMs在位内膜细胞特异性差异。　　 2.MTT结果显示:24小时后,1×10-7mmol/L来曲唑组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。各用药组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。48小时后,各用药组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。提示各浓度来曲唑在作用48小时后对体外培养EMs在位内膜细胞均有抑制增殖作用。来曲唑浓度为1×10-7mmoUL,时对EMs在位内膜细胞体外增殖抑制作用明显高于1×10-8mmol/L、1×10-9mmol/L、1×10-10mmol/L组,差异有统计学意义(P<0.05)。72小时后,各用药组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。各药物组间比较(除1×10-8mmol/L与1×10-9mmol/L两者比较),差异均有统计学意义(P<0.05)。提示来曲唑对EMs在位内膜细胞体外增殖抑制作用随浓度增大而增大,呈剂量依赖性。相同浓度来曲唑作用24小时与48小时两者比较,高浓度组(1×10-7mmol/L、1×10-8mmol/L)有明显抑制细胞增殖作用。低浓度组(1×10-9mmol/L、l×10-10mmol/L)两时间比较,差异无统计学意义。作用72小时后,各浓度组抑制细胞增殖作用与作用24h、48h比较,差异有统计学意义(P<0.05)。提示来曲唑抑制细胞增殖的作用需要一定时间,一定浓度,时间越长,作用越强,浓度越大,作用越强。呈时间-浓度依赖性。浓度为1×10-7mmol/L来曲唑作用72h抑制作用最显著。　　 3.流式细胞术检测结果发现:各用药组与对照组相比,其细胞增殖指数差异有统计学意义(P<0.05)。提示不同浓度来曲唑对EMs在位内膜细胞增殖均有抑制作用。各用药组间比较(除1×10-8mmol/L与1×10-9mmol/L两者比较),差异均有统计学意义(P<0.05)。说明来曲唑对EMs在位内膜细胞抑制增殖作用呈剂量依赖关系,浓度越大,作用越强。　　 来曲唑作用后的EMs在位内膜细胞分裂停滞在G0/G1期。　　 与正常子宫内膜细胞比较,EMs在位内膜细胞增殖指数高,差异有统计学意义(P<0.05)。表示EMs在位内膜细胞增殖活性高于正常子宫内膜细胞。　　 结论:　　 1.来曲唑对体外培养EMs在位内膜细胞具有抑制细胞增殖、促进凋亡作用。　　 2.来曲唑以浓度-时间依赖性方式抑制EMs在位内膜细胞体外增殖。　　 3.EMs在位内膜细胞的增殖能力较正常子宫内膜强。　　 4.芳香化酶抑制剂可能是一个很有希望的EMs治疗药物。