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核因子-kB (Nuclear factor-KB, NF-kB)是几乎表达于所有有核细胞,参与细胞几乎所有的生命活动,并且在自身免疫性疾病、肿瘤等人类疾病的发生、发展中发挥中重要作用。特别是在很多肿瘤中的高表达,提示了其在促进肿瘤发生、发展中的作用,但NF-kB在抗肿瘤免疫中的作用研究较少。本课题组长期从事NF-kB通路的相关研究。本课题组在前期研究的基础上,探索NF-kB通路及干扰素调节因子3(interferon regulatory factor3, IRF3)通路活化对抗肿瘤免疫反应的调节作用。本课题研究分为以下三个部分：第一部分,首先构建稳定表达目的基因的细胞系及对照细胞系,包括LLC-Mig、LLC-IKKβ、LLC-OVA-Mig及LLC-OVA-IKKβ。其次体外验证了组成型活化的IKKp可以在细胞内稳定表达,并能促进下游信号分子NF-kB转位进入细胞核内,启动目的基因趋化因子配体1(chemokine (C-X-C motif) ligand1, cxcl1)的表达。第二部分,利用所构建的稳定表达细胞株接种C57BL/6小鼠,发现LLC-Mig和LLC-IKKβ细胞都可以在小鼠体内稳定成瘤,并且生长速度无明显差异。但与LLC-OVA-Mig相比,LLC-OVA-IKKβ在肿瘤形成过程中可发生免疫排斥,肿瘤缩小甚至消失。但在Rag2-/-基因缺陷鼠中上述差异消失,提示了淋巴细胞在肿瘤免疫排斥中的作用。Tetramer法显示LLC-OVA-IKKβ小鼠外周血OVA特异性的CD8+T细胞比例未增加,Elispot显示LLC-OVA-IKKβ刺激小鼠T细胞分泌干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)的能力也未增加,只有肿瘤局部CD8+T细胞浸润增加。为了探索介导肿瘤局部T细胞浸润增加的机制,基因芯片分析LLC-OVA-Mig及LLC-OVA-IKKβ细胞基因表达差异,发现趋化因子配体2(chemokine(C-C motif) ligand2, ccl2)在LLC-OVA-IKKP中表达高于对照细胞,同时real time PCR及ELISA均验证了CCL2在LLC-OVA-IKKβ中的高表达。干扰LLC-OVA-IKKβ中CCL2的表达后,肿瘤在C57BL/6体内生长而不再出现免疫排斥,提示CCL2在趋化淋巴细胞至肿瘤局部发挥排斥肿瘤生长的过程中有重要作用。第三部分,构建能够激活NF-kB通路的其他重要分子的腺病毒表达载体,包括AdNIK、AdIRF3、AdIKKα、AdIKKβ及对照病毒载体AdGFP,所有目的基因均为组成型活化状态。首先验证了目的基因在细胞内的稳定表达,并且在TUBO乳腺癌细胞系内可以激活下游相关靶基因的转录表达；其次利用所构建的病毒载体皮下免疫Balb/c小鼠,仅细胞免疫反应有短时间的增强；但对于接种TUBO的小鼠,发现与对照相比,肿瘤内注射AdIRF3后肿瘤生长相对缓慢,并且肿瘤局部浸润CD8+T细胞及CD4+T细胞显著增加,而Treg细胞比例在各组间无明显差异。并且Elispot显示AdIRF3组T细胞在接受GFP抗原刺激后可分泌更高水平的IFN-γ。综上所述,可以得出如下结论：IKKβ可以活化NF-kB信号通路并上调CCL2的表达,CCL2可以趋化淋巴细胞至肿瘤局部,启动免疫系统的免疫清除功能,排斥肿瘤的生长；同时IRF3的激活也可以使肿瘤局部的淋巴细胞浸润增加和杀伤功能增强来延缓肿瘤的生长。