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高血压是一个全球性的公共卫生问题,全世界约有40%的人患有高血压。高血压是心血管疾病的主要可改变风险因素,可通过适当的药物加以控制。其中靶向肾素和血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂的合成药物在高血压的临床治疗中被广泛使用,但这些药物治疗的同时存在着包括味觉障碍、肾功能衰竭和血管神经性水肿等诸多副作用。研究表明天然来源的食品ACE抑制肽相较于合成ACE抑制剂更为安全且副作用少,因此寻找天然安全的作用成分来预防和治疗高血压十分有必要。近年来研究发现羊乳蛋白水解产物具有较好的降血压功能,然而目前对于山羊乳中降压肽的研究较少,活性肽的种类及其作用机制仍尚不明确。因此,本研究以筛选出的三条山羊乳源ACE抑制肽为研究对象,分析比较了不同山羊乳源ACE抑制肽的降压活性,探索了ACE抑制肽潜在的降压机制,并制备了包埋乳源肽的微胶囊以期保护其生物活性提高其生物利用度。本研究分别从机理和应用方面对山羊乳源降压肽进行了探究,为使用天然成分预防和治疗高血压的研究提供了理论的支持和方法的参考。主要研究结果如下:(1)通过检测三个肽的ACE体外抑制活性,发现LVYPFTGPIPN活性最高,其次为SQPK和DKIHP。此外,通过分子模拟得到3个肽的3D模型图并进行分子对接发现,LVYPFTGPIPN和SQPK可以通过形成氢键对接到ACE蛋白的活性位点。(2)基于人脐静脉内皮细胞EA.hy926体外培养模型进一步研究了3种山羊乳源肽对细胞一氧化氮(NO)生成的影响。结果表明,LVYPFTGPIPN、DKIHP和SQPK的添加浓度分别在小于2、50和25μg/m L时,对细胞增殖无显著影响(p>0.05);在此基础上,选择不同浓度梯度的三种肽分别处理细胞。结果发现,处理12 h后,添加不同浓度(6.25,12.5 and 25μg/mL)SQPK均可显著提高NO的生成量(p<0.05);处理24 h后,添加2μg/m L LVYPFTGPIPN可显著增加NO的生成(p<0.05)。进一步研究发现,与对照组相比,2μg/m L的LVYPFTGPIPN处理24h和25μg/m L的SQPK处理12 h均可显著提升细胞内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的蛋白表达水平(p<0.05)。此外,与对照相比,添加1和2μg/m L LVYPFTGPIPN处理24 h可显著降低AT1R m RNA的表达水平,而25μg/m L SQPK处理细胞12 h可显著升高ACE2的m RNA表达水平。因此,LVYPFTGPIPN和SQPK在EA.hy926细胞中可以通过增加e NOS的表达,促进NO分泌,此外还可能分别通过影响AT1R和ACE2 m RNA的表达来实现降血压作用。(3)在发现LVYPFTGPIPN和SQPK具有较强的潜在降压活性的前提下,进一步采用了全基因组测序和分子生物学技术对这2个肽的降压机制进行了探索。收集并提取对照组和LVYPFTGPIPN、SQPK处理组内皮细胞EA.hy926总RNA进行转录组测序。主成分分析(PCA)结果发现,与对照组相比,添加LVYPFTGPIPN或SQPK与对照组明显发生不同聚类,表明这两个肽均可显著影响内皮细胞全基因表达谱;全基因组的基因表达差异分析发现,添加LVYPFTGPIPN或SQPK分别与其对应处理时间的对照组相比,分别得到372和303个差异表达基因(FDR<0.05,并且|log2FC|>=1);进而对上述差异表达基因进行功能富集分析,研究发现LVYPFTGPIPN或SQPK处理的差异基因大多富集到与免疫反应相关GO和KEGG通路上。其中:LVYPFTGPIPN处理后的差异表达基因,富集到糖尿病并发症中的细胞凋亡、Wnt信号通路、库欣综合征、内分泌抵抗、AGE-RAGE信号通路等KEGG信号通路,LVYPFTGPIPN可以降低FOS、ICAM1、DDIT3和CDKN1B的m RNA表达。除了FOS,在TNF信号通路和T细胞受体信号通路中,LVYPFTGPIPN还降低了JNK(MAPK8、MAPK9和MAPK10)中MAPK8和JUN基因的m RNA表达水平,进而可能降低AP-1的表达水平;SQPK处理后的差异表达基因,富集到TGF-β信号通路、类风湿性关节炎、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、TNF信号通路和IL-17信号通路等KEGG信号通路,SQPK处理可以降低IL6R、NFATC1、CCL2、KLF4和ARG2的m RNA表达水平。(4)选择海藻酸钠对LVYPFTGPIPN进行包埋,制成微胶囊的包埋率和载肽量分别为56.14±3.14(%)和0.15±0.01(g/g)。对微胶囊进行表征,然后通过体外胃肠道模拟消化试验,表明该微胶囊在胃液消化下保存了67.3%的肽,而在肠液消化下仅保留了9.5%的肽。微胶囊可有效防止肽在胃环境中的释放,从而将其在肠道环境中的化学降解降至最低,实现缓释功能提高其生物利用度。