酪氨酸酶广泛存在于人、动物、植物和微生物中，是参与黑色素合成的关键酶。酪氨酸酶活性越高，生成的黑素也越多，其表达和活性决定着黑色素生成的速度和产量，控制其活力即可控制黑素生成量，因此酪氨酸酶抑制剂临床应用于与黑色素失调相关疾病的治疗且在美白化妆品应用方面具有重要作用。白僵菌作为生物防治中被应用最广泛的虫生真菌，多年来对其发酵产物中生物活性物质的研究少人问津。本研究采用安徽农业大学微生物防治重点实验室多年采集保藏的众多白僵菌菌株中挑选44株不同来源、不同寄主、不同地理来源的白僵菌作为实验对象，并对其分别进行静置发酵培养和摇床发酵培养，共得到88个培养物，对培养物进行真空冷冻干燥，然后用甲醇提取其中的活性物质以进行以酪氨酸酶二酚酶抑制率为指标的初筛实验。筛选结果显示有12个样品对二酚酶的抑制率高于50%，分别为：Bbr03（摇床）、Ba08（摇床）、Bb307（摇床）、Bb2513（摇床）、Ba03（摇床）、Ba09（摇床）、Ba14（摇床）、Ba14（静置）、Bbr59（摇床）、Ba01（静置）、Ba07（摇床）、Ba08（摇床）。以抑制单酚酶活性和二酚酶活性作为评价指标，对初筛的12个样品进行复筛实验，结果表明Ba03具有比其它11个样品更高的抑制率表现，对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶的抑制率分别为75.06%和64.43%。通过单因素实验及正交实验对Ba03菌株抑制酪氨酸酶活性成分的培养条件进行优化，发现Ba03菌株产活性成分的最佳培养基组成为：麦芽糖20g/L、甘油20g/L、黄豆粉23.3g/L、K2HPO40.05g/L、MgSO4·7H2O0.03g/L、MnSO4·H2O0.001g/L。最佳培养工艺为：培养时间12天、种龄7天、接种量10ml、培养温度25℃、摇床转速180rpm。酪氨酸酶的IC50的测定实验结果表明，Ba03菌株发酵液提取物的单酚酶活性的IC50为223.38μg/ml，二酚酶活性的IC50为327.58μg/ml。采用RP-HPLC和活性测定联合分析发现，Ba03甲醇提取物中的活性组份主要有3个部分，它们在HPLC上的保留时间分别是24-26min、30-32min和32-34min的流份。用制备高效液相色谱（Prep-HPLC）对Ba03甲醇提取物中酪氨酸酶抑制剂进行了分离制备，得到活性组份B-1、B-2和B-3。高分辨质谱分析结果显示，该活性组分的可能分子式分别为C₃₀H₅₅N₅O₅、C₁₀H₁₄N₆O₄和C₁₀H₁₂N₂O₂。天然产物数据库查询发现它们对应的化学物质可能分别为槲寄生酰胺、2’-氨基-2’-脱氧鸟苷和一种新化合物。