第一部分 新生豚鼠海马神经干细胞的培养、鉴定及定量观察 目的 神经干细胞(neuronal stem cells，NSCs)的研究已逐渐成为国内、外基础及临床医学各专业的重要研究课题。NSCs是一种成体干细胞，存在于胚胎和成年哺乳动物中枢神经系统的多个区域，属多能干细胞，在一定的微环境中具有自我更新和向神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞分化的能力，且具有极强的可塑性，利用NSCs进行细胞移植治疗或基因治疗有很好的临床应用前景。本实验旨在建立一套完整的方法分离培养豚鼠海马NSCs、定量观察连续传代培养获得的克隆球中NSCs的比例，为进一步分离、纯化NSCs来进行细胞移植治疗提供细胞学帮助和数据依据。 方法 ①应用无血清培养技术，加入EGF和bFGF(终浓度为20μg／L)，分离新生豚鼠海马组织进行NSCs的原代、传代培养；用100ml／L胎牛血清对NSCs进行诱导分化培养；将BrdU加入传代培养的细胞培养基中，终浓度为10μg／ml。应用免疫细胞化学技术，行Nestin、BrdU、NF、GFAP和S100染色，鉴定NSCs的增殖能力和多分化潜能。②联合应用免疫细胞化学技术和单细胞克隆技术定量观察连续传代培养获得的克隆球中NSCs的比例。