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目的探讨大蒜有机硫化物二烯丙基三硫化物(dially trisulfide, DATS)的抗炎作用,并从分子水平阐明DATS的抗炎作用机理及抗炎与抗氧化作用之间的相互关系,以便为DATS药用和保健产品的开发提供研究基础,同时也为DATS在医学治疗中的应用提供科学依据和探索出新的途径。方法本研究主要以DATS纯品为研究对象,采用生物炎症诱导剂脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激生长良好的小鼠RAW264.7细胞建立细胞炎症模型;用Bio-plex悬浮式芯片系统检测23种细胞因子;Western blotting免疫印迹分析方法检测COX-2和iNOS蛋白的表达,NO检测试剂盒和酶联免疫分析(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)试剂盒检测细胞培养液中NO和(PGE)2含量;Western blotting免疫印迹分析方法检测MAPK信息通路、NF-κB信息通路及两条通路的共同上游分子TAK1与AKT和IRF3信息通路总蛋白和磷酸化蛋白。采用双氯荧光(DCFH-DA)探针检测RAW 264.7细胞内ROS水平;采用Western blotting免疫印迹分析方法检测细胞内抗氧化蛋白与HSP70应激蛋白的表达。采用LPS足趾注射建立小鼠急性炎症模型,ELISA试剂盒检测小鼠血清中的TNF-a, IL-6和MCP1等细胞因子。研究结果1:DATS对COX-2和iNOS蛋白表达及对(PGE)2和NO生成与释放的影响研究结果表明:DATS剂量依赖性地抑制LPS诱导的RAW264.7细胞COX-2和iNOS蛋白的表达及(PGE)2和NO的生成与释放量,结果揭示COX-2、iNOS、(PGE)2和NO是DATS抗炎作用的目标分子,DATS的抗炎作用之一是通过减弱iNOS和COX-2的表达,进而抑制炎症介质NO和(PGE)2的生成与释放来实现的。研究结果2:DATS对LPS诱导的RAW264.7细胞23种细胞因子表达的影响结果表明:DATS可显著降低RAW264.7中IL-6, IL-10, IL-12(p70), TNF-a, KC和MCP-1等6种细胞因子的诱导性表达(P<0.01)。结果提示,IL-6, IL-10, IL-12(p70), TNF-a, KC和MCP-1等6种细胞因子是DATS抗炎作用的目标分子,DATS的抗炎作用之二是通过减弱这6种细胞因子的表达来实现的。研究结果3:DATS对LPS诱导的RAW264.7细胞TLR4受体细胞信号传导通路的影响结果表明:DATS不但可抑制LPS诱导的ERK、p38、JNK和c-Jun蛋白的磷酸化,阻断MAPK信息通路;同时也可显著抑制LPS诱导的IκB-a和p65蛋白磷酸化,降低IκB-a蛋白的降解和p65的核移位,阻断NF-κB信息通路;DATS还可抑制NF-κB和MAPK信息通路上游分子TAK1和AKT1蛋白的磷酸化作用,下调AKT1/TAK1信号通路。结果揭示:DATS的抗炎分子机理是通过阻断NF-κB、MAPK和IFR-3等炎症信息通路,进而抑制LPS诱导的胞内磷酸化级联反应,从而使各种炎症细胞因子和炎症介质的表达与释放受到抑制,降低炎症反应。研究结果4:DATS对Nrf2, HO-1和NQO1抗氧化蛋白表达和对氧化应激的影响结果表明:DATS可通过下调Nrf2、HO-1和NQO1抗氧化蛋白表达,减少ROS的产生,下调HSP70应激蛋白的表达,拮抗LPS刺激所导致的氧化应激,从而发挥抗氧化和氧化应激保护作用。研究结果5:体内抗炎研究结果表明:DATS可抑制小鼠足趾肿胀度,显著降低LPS诱导的小鼠血清中IL-6、MCP1和TNF-a的表达(p<0.05)。结果揭示:DATS对小鼠急性炎症有明显的抑制作用和体内抗炎效果。结论DATS通过阻断NF-kB、MAPK和IRF-3信息通道,从而降低IL-6, IL-10, IL-12(p70), TNF-a, KC和MCP-1, iNOS和COX-2等细胞因子和炎症介质的表达与释放,降低炎症的损伤。DATS可激活Nrf2-Keap1-ARE信号通路减少ROS的产生,并抑制MAPK和NF-kB信息通路,实现对炎症反应的负调控,进一步降低LPS所致炎症损伤。DATS是一种既有抗炎作用,又具有提高细胞抗氧化功能的有效天然化合物。