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研究背景与实验目的:原发性胆汁性肝硬化(Primary biliary cirrhosis, PBC)是一种自身免疫性肝脏疾病。好发于中年妇女,组织学上以小叶间胆管进行性损伤表现为主;血清中出现碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, ALP)和免疫球蛋白M(Immunoglobulin M, IgM)升高和多种自身抗体阳性,其中以M2型抗线粒体抗体最为特异。调节性T细胞(Regulatory T cell, Treg)是一类重要的免疫调节细胞,控制着体内自身免疫反应,在免疫耐受和动态平衡中起中心作用。机体在健康的情况下,功能完好的Treg可以使肝脏中的免疫反应处于抑制状态。一旦Treg数量和功能出现受损,免疫耐受就被打破。CD3+细胞可以包括经典T细胞(CD3+CD56-)和自然杀伤T(Natural killer T, NKT)细胞(CD3+CD56+)。 NKT细胞被报道可促进自身免疫反应,其作用机制可能与破坏Th1/Th2类型反应平衡,调节其分泌细胞因子有关。本课题通过对临床患者外周血中细胞因子和淋巴细胞分布进行检测,体外实验研究其数量和功能上的改变,发现这两种细胞在PBC发病中的作用和相互关系,旨在找到一条影响PBC发病的免疫机制。研究方法:通过收集,整理和分析55例PBC患者的临床资料,并用流式细胞术检测外周血中Treg和NKT细胞的比例,数量和酶联免疫实验(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测相关细胞因子水平。分离出样本中的单个核细胞,分选培养以通过体外实验检测其功能。研究结果:第一部分:结果表明PBC患者的Treg数量和产生白介素-10(Interleukin-10, IL-10)的能力都显著下降;PBC患者的Treg难以有效抑制T细胞的增殖和干扰素(interferon-γ, IFN-γ)的产生,Treg具有抑制T细胞对胆管上皮细胞的杀伤能力的作用,PBC患者的Treg细胞的这种抑制作用低于健康对照组;另外,PBC患者DC表面的CD80/CD86共刺激分子显著增高并且在自身抗体刺激后上升更为显著:PBC患者PBMC抑制肝星形细胞表达的平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)能力减弱;PBC患者的Treg抑制DC表面CD86的表达能力显著减弱。PBC患者PBMC抑制肝星形细胞表达的α-SMA能力减弱。第二部分:结果发现,在PBC患者外周血中CD3+CD56+NKT细胞数量显著上升;而经典T细胞(CD3+CD56-)的数量与健康成人无明显差异。PBC患者外周血血浆中,IL-17及其相关上下游细胞因子水平均上升:胞内染色发现CD3+CD56+NKT细胞是产生IL-17最多的一群细胞;用分离的自身抗体刺激PBMC后,上清中IL-17水平显著上升,并且上升最多的来源即为CD3+CD56+NKT细胞:1L-17可以使肝星形细胞活化产生转化生长因子(Transforming growth factor-β, TGF-β)和表达α-SMA,且呈剂量依赖,PBC患者的PBMC可使肝星形细胞活化产生更高水平的TGF-β。结论:在PBC发病过程中Treg数量,比例和功能的下降,导致其抑制树突细胞活化和炎症发生的能力显著降低;与此同时,NKT细胞在自身抗原等刺激下产生IL-17,促进肝星形细胞活化。Treg的抑制作用不足以抑制NKT细胞的促炎作用,使纤维化进一步发展。