抗人FcεRIα单克隆抗体的制备及初步鉴定

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目的:制备鼠抗人的IgE高亲和力受体FcεRIα的单克隆抗体并对其进行鉴定,为过敏性疾病的相关研究提供条件。 方法:用IgE高亲和力受体FcεRIα重组蛋白作为抗原免疫BALB/C小鼠,常规方法进行融合,经筛选及克隆化建立可稳定分泌抗人FcεRIαMcAb的杂交瘤细胞株,用ELISA、流式细胞仪,免疫荧光以及Western-blot方法进行抗体的初步鉴定。竞争结合试验初步检测所制备抗体的生物活性。 结果:共制备出2株抗人FcεRIα单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为B5B4和B4C2。流式细胞术分析此2株抗体与转染人FcεRIα的中国仓鼠细胞系CHO3D10细胞的结合率分别为96.2%、97.4%,与表达FcεRI、FcγRII的人嗜碱性粒细胞系KU812E细胞的结合率分别为96.7%、95.4%,免疫荧光显示2株抗体均能与FcεRIα发生特异性反应。Western-blot结果显示抗体轻重链分别约28Kd与50Kd。竞争结合试验检测显示所制备出的纯化抗体表现出很好的对IgE与含人Fc受体的嗜碱性粒细胞系KU812E细胞结合的竞争抑制活性。 结论:成功制备出了两株抗人FcεRIα单克隆抗体B5B4和B4C2,并经过初步鉴定证实,可用于肥大细胞功能以及变态反应病临床治疗的进一步研究。
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