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链孢粘帚霉Gliocladium catenulatum是一类分布广泛的丝状真菌,可以寄生多种植物病原真菌,具有较大的生防潜力。为研究链孢粘帚霉HL-1-1寄生核盘菌菌核的相关基因,对本实验室前期构建的差异表达cDNA文库中序列进行测序和比对分析,采用荧光定量PCR技术对在菌核粉诱导条件下与寄生相关基因的表达量进行定量监测,运用RACE技术获得了三条与寄生作用相关基因的序列全长。从差异表达的cDNA文库中随机挑取504个克隆进行测序,去掉载体序列和小于100bp的序列,得到303条高质量ESTs序列,平均长度为423bp。经过拼接后,获得128条单值基因,其中包括23条重叠群(contiges)和105条单拷贝EST (singletons)。将得到的单值基因用BLASTx程序在NCBI的非冗余(NR)数据库进行序列分析,其中32个序列是已知功能基因,其中细胞色素P450、核糖体蛋白、血红素加氧酶、脂滴包被蛋白以及内切葡聚糖酶等都与机体在胁迫条件下的应答反应有关；来源于不同物种的功能未知基因有85条；11条基因与数据库中没有同源性,代表新基因片段。为明确功能未知基因6-61、8-13和内切葡聚糖酶基因8-20在菌寄生菌链孢粘帚霉HL-1-1寄生核盘菌菌核过程中的作用,本研究应用SYBR Green I法对三个基因进行real-time PCR法进行相对表达的定量监测,结果表明：未知功能基因6-61在菌核粉的诱导下表达量呈下降趋势,且在96h达到最低；基因8-13的表达量呈现先下降后上升,在96h的表达量超过诱导前的表达量；内切葡聚糖酶基因8-20的表达水平随菌核粉诱导培养时间的延长而升高,在96h后表达量升高9倍。因此,相对表达量的定量监测表明这三个基因参与了菌寄生过程。通过RACE技术获得基因6-61、8-13和8-20的全长序列,并通过生物信息学方法进行初步分析,其中基因6-61cDNA序列全长1247bp (Genbank登录号JQ811207),可以编码129个氨基酸,与绿僵菌Metarhizium acridum CQMa有较高同源性,属于功能未知蛋白；基因8-13可编码cDNA序列全长1308bp (Genbank登录号JQ811208),可以编码176个氨基酸,与青霉菌Penicillium marneffei ATCC18224有较高同源性,但属于功能未知蛋白；基因8-20cDNA序列全长1479bp (GenBank登录号JQ728996),开放阅读框(ORF)长1269bp,编码423个氨基酸,与木霉Trichoderma sp. SSL内切葡聚糖酶的同源性高达94%,命名为eg8-20。采用同源重组原理构建链孢粘帚霉HL-1-1功能未知基因8-13和内切葡聚糖酶基因8-20的敲除载体,并成功获得敲除转化子UD-6和ED-3。以野生型菌株为对照,对转化子进行表型分析,结果显示：基因敲除转化子的生长速度、产孢量与野生型无显著差异。室内生物测定表明,转化子能够抑制核盘菌菌核萌发,但其侵染能力明显减弱,UD-6寄生级别由野生型菌株的四级降为三级,而ED-3由野生型菌株的四级降为二级,证明基因8-13和8-20在链孢粘帚霉寄生核盘菌菌核过程中发挥着重要的作用。