论文部分内容阅读
蜕皮抑制激素(Molt-inhibiting hormone,MIH)是甲壳类高血糖激素(Crustaceanhyperglycemic hormone,CHH)家族的一员。长期以来,对于MIH的功能研究主要集中在其对于甲壳类蜕皮过程的抑制作用。然而,通过对对虾中所有已报道的CHH家族多肽进行系统进化树分析发现,MIH和另一个CHH家族成员卵黄生成抑制激素(Vitellogenesis-inhibiting hormone,VH)具有很近的亲缘关系。VIH是甲壳动物卵黄生成作用的有效抑制因子,在调控雌虾性腺发育过程中发挥重要作用。本研究选用凡纳滨对虾为研究对象,将凡纳滨对虾MIH1和MIH2成熟肽序列分别克隆至带有6个组氨酸标签(6×His-tag)的表达载体pET-28a(+) Vector中,构建了凡纳滨对虾MIH1和MIH2的重组原核表达质粒。将重组质粒转化至大肠杆菌并诱导目的蛋白表达。通过以抗6×His-tag的单抗为一抗的Western杂交鉴定重组蛋白确为rLivMIH1和rLivMIH2重组蛋白。利用透析的方法使溶解的包涵体复性,之后再通过镍离子金属螯合亲和层析的方法对重组蛋白进行了纯化。再通过一系列细胞和体内实验来研究MIH在调节雌虾性腺发育过程中的作用。将重组蛋白与对虾肝胰腺原代细胞共同孵育培养15小时发现,rLivMIH2能够显著提高细胞中卵黄蛋白原(VTG)基因的表达量而rLivMIH1不能。将适量的重组蛋白分别注射到对虾活体中并进行培养发现,对虾注射rLivMIH2重组蛋白后肝胰腺中VTG基因的表达量从第四天开始与对照组相比有显著增加,第六天性腺指数开始显著上升,卵巢发育明显加快,而注射rLivMIH1重组蛋白后对虾肝胰腺中VTG基因的表达量和卵巢发育速度没有明显变化。本研究证明了凡纳滨对虾的MIH2不仅具有调节蜕皮的功能,还能促进卵黄生成作用进而影响性腺发育,可能是协调蜕皮和卵黄生成两个生理过程的重要因素,为将来利用MIH2或CHH家族多肽来人工调控甲壳动物的性腺发育提供新的思路。