背景:以肿瘤新生血管为治疗靶点的抗血管生成治疗成为了肿瘤治疗领域新兴的研究热点。但由于肿瘤分子调控通路的的多样性、调控机制的复杂性，单一的抗血管生成药物治疗作用有限，且无法避免药物毒副作用、肿瘤耐药性的产生等。超声空化效应是超声波热效应之外另一主要的物理效应，是指液体中的微气泡（或称空化核）在超声激励下产生收缩、膨胀、振荡乃至内爆，局部产生高温、高压、微射流等极端物理条件的现象。超声造影剂微泡经静脉注射后，作为一种有效的外源性空化核，在声压1MPa以上的超声能量辐照下产生显著的空化效应，会导致局部血管内皮细胞通透性增高，甚至受损破裂。而肿瘤新生血管因其发育不完全、结构薄弱，可能较正常血管更易受到空化损伤。在前期实验中，我们已经证实微泡超声空化可以机械性毁损肿瘤微血管，造成24h的血流阻断效应。经皮无水酒精消融（Percutaneous ethanol ablation, PEA）以往在小肝癌治疗中应用广泛，但由于肿瘤丰富的血流灌注对酒精的冲刷稀释作用，其消融范围往往受限。微泡超声空化预处理治疗造成的肿瘤血流灌注的阻断效应可能显著减少酒精被血流冲刷稀释，从而增强无水酒精的肿瘤消融能力。同时超声空化治疗方法操作简便，非创伤性，与其他阻断肿瘤血流灌注的介入性方法相比，能更好地满足无水酒精消融需多次反复进行的需要。目的:1.观察微泡增强的超声空化对人类恶性肿瘤移植瘤动物模型血流灌注的影响，进一步探讨超声空化治疗对肿瘤血管的机械性毁损机制。2.通过观察单纯超声空化治疗、单纯无水酒精消融治疗以及两者联合治疗对肿瘤血流灌注及24小时坏死情况的影响，探讨微泡增强的超声空化对酒精消融效果的影响作用。材料与方法:1.实验材料：(1)实验仪器：①CZ-960型脉冲式超声空化治疗仪，由绵阳索尼克电子有限责任公司研制，其治疗头工作频率为831KHz，超声发射脉冲宽度、脉冲重复频率、工作/间歇时间、峰值声压等参数可调节。②超声诊断仪为西门子公司S2000型彩色多普勒超声诊断仪，配有低机械指数超声造影模式及时间-强度曲线在线分析软件，可实现造影的定量分析。(2)微泡试剂：本实验超声造影所使用造影剂及空化治疗所使用微泡制剂均为我科自行研制的脂膜微泡“脂氟显”，其核心气体为全氟丙烷，微泡浓度约4~9×109/ml，平均粒径2μm，经高频机械振荡后形成乳白色凝乳状液体。(3)实验动物：健康Balb/c (nu/nu)裸鼠28只，雌雄不限，体质量18-23g，4-5周龄，饲养环境SPF级；雌性SD大鼠30只，体质量160-180g，饲养环境清洁级。所有实验动物均由第三军医大学新桥医院实验动物中心提供并检疫。2.实验方法：(1)裸鼠HepG2皮下移植瘤超声空化治疗实验：26只皮下荷HepG2肿瘤荷瘤鼠随机分为3组，即微泡超声空化组、单纯超声辐照组以及单纯微泡组。微泡超声空化组经球后静脉推注微泡0.04ml同时联合治疗超声辐照肿瘤5min；单纯超声辐照组以生理盐水代替微泡；单纯微泡组仅推注微泡而不发射超声能量，进行假照。治疗前及治疗后即刻对各组肿瘤进行超声造影检查，并分析肿瘤区域造影TIC曲线。治疗结束后获取肿瘤组织，常规HE染色及电镜制片，观察肿瘤组织病理改变。(2)大鼠Walker-256皮下肿瘤超声空化治疗联合酒精消融实验：28只皮下荷Walker-256肿瘤SD大鼠随机分为3组，即超声空化治疗组、无水酒精消融组以及空化联合酒精治疗组。超声空化组经尾静脉推注脂质微泡0.04ml同时联合治疗超声辐照肿瘤5min，无水酒精消融组于超声引导下瘤内注射无水酒精0.3ml，联合治疗组首先对肿瘤进行超声空化治疗，随后于瘤内注射等量无水酒精。各组动物治疗前、治疗后即刻及24小时后进行超声造影检查，分析TIC曲线。随后处死动物，分离切取肿瘤组织，固定，包埋，切片，观察肿瘤组织病理改变情况。每个肿瘤标本随机选取3个不相邻切片，分别计算其坏死率。结果:1.裸鼠HepG2皮下移植瘤治疗实验结果：微泡超声空化组肿瘤治疗后造影呈非灌注负性增强，其PI值由治疗前的（26.9±10.9）%降至（8.2±5.8）%，AUC值由（1210.4±823.1）%s下降至（291.6±255.2）%s (P＜0.05)；而单纯超声辐照组、单纯微泡组治疗后造影肿瘤内部未见明显充盈缺损，治疗前后比较其PI值及AUC值无明显变化(P＞0.05)。病理观察可见微泡超声空化组部分肿瘤血管壁断裂、管壁不完整、血管内皮细胞肿胀，组织间隙内弥漫性出血、不规则血肿形成，组织水肿。2.大鼠Walker-256皮下肿瘤治疗实验结果：各组治疗后即刻及24h后造影均可见肿瘤内部大范围非增强负性显影；与治疗前相比，24h后各组肿瘤造影PI值及AUC值均有显著下降，其中超声空化组PI值下降了30.9%，AUC值下降了43.4%，无水酒精消融组PI值下降了46.3%，AUC值下降了52.5%，联合治疗组PI值下降了84.8%，AUC值下降了90.1%，其差异均有统计学意义(P＜0.05)；各组肿瘤坏死率分别为：超声空化组（66.17±12.54）%，无水酒精消融组（81.02±8.23）%，联合治疗组（97.50±1.84）%，联合治疗组肿瘤坏死率显著高于其他两组(P＜0.01)。病理观察可见各组肿瘤内部均为大范围凝固性坏死。结论:1.微泡增强的超声空化能够显著降低人类肝癌HepG2肿瘤裸鼠皮下移植瘤的血流灌注，其机制主要是肿瘤微血管毁损，导致局部血肿血栓形成。2.超声空化联合瘤内无水酒精消融可显著提高大鼠Walker-256肿瘤坏死率。