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目的:(1)优化滤膜吸附-洗脱法富集水体病毒的反应条件,以便有效富集水体病毒(2)制备脊髓灰质炎病毒多克隆抗体,构建免疫磁珠,探讨免疫磁珠捕获法富集水体病毒的可行性。方法:(1)采用膜吸附洗脱法初次浓缩水体病毒,调节水样pH值和Al3+浓度,比较不同pH值、有无金属阳离子情况下,水体中病毒的回收率,根据回收率高低选择最佳条件进行病毒富集。(2)采用聚乙二醇(PEG)6000沉淀法二次浓缩水体病毒,配制不同浓度的PEG6000溶液,比较各浓度下病毒回收率的高低,选择合适浓度进行病毒二次浓缩。(3)将不同滤膜和不同洗脱液组合进行序贯试验,比较各组合回收率,选择最佳组合进行病毒富集。(4)用纯化的脊髓灰质炎病毒抗原免疫日本大白兔,皮下多点注射,制备脊髓灰质炎病毒多克隆抗体,间接ELISA法测定抗体效价,核酸蛋白仪测定抗体浓度。将制备的脊髓灰质炎病毒多克隆抗体与微磁珠偶联构建免疫磁珠,富集水体病毒,实时定量PCR法检测病毒回收量,计算病毒回收率,评价免疫磁珠捕获法对病毒的吸附效果。结果:(1)pH=4.0时,病毒回收率为70.81%,较其他pH值高;加AlCl3的病毒回收率76.73%较不加AlCl3的55.51%高;病毒回收率随PEG6000浓度增加而增大,PEG6000浓度在120g/l时,病毒回收率可达85.90%,继续增加PEG6000浓度,病毒回收率变化不明显;将混合纤维素酯滤膜和H2SO4/NaOH洗脱液组合,病毒回收率为75.17%,病毒富集效果较其他组合好。(2)纯化后抗体效价为1:8000,抗体浓度12.87mg/ml,用纯化的抗体包被空白磁珠,空白磁珠对脊髓灰质炎病毒多克隆抗体的饱和吸附量为143.5μg/mg,将制备的免疫磁珠加入到不同浓度脊髓灰质炎病毒液中,在100倍稀释的病毒液中可回收63.67%。结论:(1)水体中加入多价金属阳离子可增加病毒回收率;不同pH条件下,病毒回收率不同,pH=4.0时,病毒回收率最高;混合纤维素酯滤膜吸附,H2SO4/NaOH洗脱液洗脱,病毒富集效果好;增加PEG6000浓度可提高病毒回收率,当PEG6000浓度在120g/l时,病毒回收率可达85%以上,效果较好。(2)成功制备脊髓灰质炎病毒多克隆抗体,效价较高;抗体包被磁珠效果并不理想,尚不清楚是由磁珠氨基化修饰或抗体偶联哪一过程引起。最后将免疫磁珠应用到水体病毒富集中,虽然效果不及膜吸附洗脱法,但回收率尚可,本过程未考虑磁珠浓度、病毒浓度、水体pH值、水中有机干扰物等对病毒回收率的影响,有待进一步研究。