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目的探讨新型MyD88抑制剂TJ-M2010-5抑制MyD88同源二聚化和异源二聚化的作用并阐明其机理,为计算机辅助药物设计提供实验依据。方法体外构建Flag-MyD88 pcDNA3.1-, HA-MyD88 pcDNA3.1-和Flag-TIRAP pcDNA3.1-质粒,采用免疫共沉淀方法,将Flag-MyD88 pcDNA3.1-和HA-MyD88 pcDNA3.1-共转染HEK293T细胞,以及Flag-TIRAP pcDNA3.1-和HA-MyD88 pcDNA3.1-共转染HEK293T细胞,并给与不同浓度TJ-M2010-5干预(0μM,10μM,40μM),转染48小时后检测MyD88-MyD88以及TIRAP-MyD88的结合能力。体外诱导培养BALB/c小鼠不成熟骨髓源性树突状细胞,培养第7天给予不同浓度TJ-M2010-5干预(0μM,10μM,40μM)2小时后,给予LPS刺激活化TLR信号通路,48小时后,通过EMSA方法检测细胞核内转录因子NF-κB的含量,ELISA方法检测细胞培养上清中TNF-α和IL-1β表达水平。结果TJ-M2010-5剂量依赖性的抑制MyD88-MyD88和TIRAP-MyD88结合能力,随着剂量增加,抑制作用加强。体外诱导培养BALB/c小鼠,给予不同浓度TJ-M2010-5干预和LPS刺激后,TJ-M2010-5抑制NF-κB入核,以及TNF-α和IL-1β的表达水平,并且随着TJ-M2010-5浓度增加,抑制作用逐渐加强。结论TJ-M2010-5通过干扰MyD88-MyD88同源二聚化和TIRAP-MyD88异源二聚化从而发挥了抑制MyD88二聚化的作用,同时,TJ-M2010-5进一步抑制了TLR/MyD88信号通路的活化。因此,TJ-M2010-5可以作为一种有效的MyD88抑制剂干预依赖MyD88的TLR信号通路,为将来应用于临床奠定理论基础。目的探讨新型MyD88抑制剂TJ-M2010-5在防治AOM/DSS诱发小鼠CAC中的作用及机制,为TJ-M2010-5进一步临床应用提供实验依据。方法通过联合使用AOM和DSS诱导小鼠CAC模型,并给予TJ-M2010-5干预。小鼠腹腔注射大剂量TJ-M2010-5后,通过观察小鼠活动度等指标以评估药物急性毒性：小鼠腹腔注射常规剂量TJ-M2010-5后,通过检测小鼠血常规指标,肝脏、肾脏HE染色以评估药物亚急性毒性。实验分为三组：Normal组,AOM/DSS组,TJ-M2010-5组。观察10周,记录建模后小鼠体重变化,生存率差异。体外培养RAW264.7细胞,TJ-M2010-5干预后给予LPS刺激,检测细胞内IRAK4、p38、Erk磷酸化水平,同时,通过EMSA方法检测结肠组织中NF-κB入核能力,以评估TJ-M2010-5对CAC小鼠TLR/MyD88信号通路的影响。大体观察小鼠结肠肿瘤形成情况并通过HE染色分析肿瘤恶性程度,COX2免疫组织化学染色和Western blot分析评价肿瘤进展情况。结肠HE染色检查评估炎症反应程度,MPO免疫组织化学染色检测中性粒细胞浸润情况。BrdU掺入法和Ki-67染色检查结肠上皮细胞增殖状况,活性caspase-3染色和TUNEL染色检查结肠上皮细胞凋亡状况。Bio-Plex和ELISA方法分析CAC小鼠血清细胞因子蛋白表达水平,qPCR方法分析结肠细胞因子mRNA水平。免疫组织化学染色方法检测结肠CD68+巨噬细胞浸润情况,流式细胞技术分析结肠LPMC中巨噬细胞、DC、CD4+T细胞比例,qPCR方法分析LPMC中巨噬细胞IL-6 mRNA水平。结果联合使用AOM和DSS成功诱发了小鼠CAC模型。药物安全性评估显示TJ-M2010-5不会对小鼠产生急性和亚急性毒性作用。TJ-M2010-5抑制了CAC小鼠TLR/MyD88信号通路活性。与AOM/DSS组相比,长期给予TJ-M2010-5干预后,小鼠死亡率从53%降低至0%,恶性肿瘤发生率从100%降至0%,并进一步抑制了CAC小鼠体重下降的趋势,降低了结肠上皮细胞增殖能力并促进了上皮细胞凋亡,抑制了结肠肿瘤的发生发展并降低了肿瘤恶性程度。同时,TJ-M2010-5干预抑制了细胞因子的分泌以及结肠组织中性粒细胞和免疫细胞的浸润,调节了结肠组织炎性微环境。结论异常的TLR/MyD88信号通路活化诱导结肠组织中促肿瘤发生的炎性微环境形成,给予TJ-M2010-5干预后,通过调节炎性微环境并抑制免疫细胞的浸润,遏制了肿瘤微环境的形成,从而起到防治CAC发生和进展的作用。MyD88抑制剂TJ-M2010-5发挥了强大的抗击CAC发生和进展的效果,具有较好的临床应用价值,将为临床上治疗结肠炎或CAC患者提供更多的选择。