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[目的]探索厦门地区原发性肝癌的危险因素和保护因素,并研究MBL2基因多态性及单体型对肝癌发病风险的影响。通过生物学研究来分析MBL2单体型的功能,并研究MBL2单体型对乙肝病毒突变的影响。[方法]1、采用1:1的病例对照研究设计,对315例原发性肝癌病例和相同数量的健康对照进行问卷调查,使用ELISA法检测乙肝感染状况,并运用单因素条件Logistic回归和多因素Logistics回归计算各因素的OR值和95%置信区间,使用随机森林寻找厦门人群原发性肝癌风险的主效应因素。按乙肝病毒的感染状况分层,分别计算各影响因素与肝癌发病风险的关联2、采用高分辨熔解曲线法对原发性肝癌病例和健康对照进行MBL2的基因分型,采用单因素条件Logistic回归计算各位点基因型和等位基因的OR值和95%置信区间。使用Haplo.stats计算MBL2单体型的频率并采用广义线性模型计算MBL2单体型的肝癌发病风险。3、采用PCR法获得MBL2各单体型的序列片段克隆到p GL3-Basic载体,转染到293T细胞中,采用荧光素酶报告基因分析MBL2各单体型的荧光素表达水平。4、对50例未经治疗的慢性乙肝感染者进行MBL2基因分型和单体型构建,并对乙肝病毒进行深度测序。按MBL2单体型进行分组,并比较HBV基因组各区域的突变数量、单碱基突变的频率,以及通过计算各区域的香农熵比较准群的复杂性。[结果]1、单因素条件Logistic回归分析显示乙肝表面抗原阳性、最近10年室内装修、食用腌制食品、食用烟熏食品、食物霉变、家庭被动吸烟、工作场所被动吸烟、经常饮酒和总是饮酒、肝脏疾病史与肝癌的发病风险呈正相关关联;使用冰箱、每天食用水果、饮茶、饮用咖啡是肝癌的保护因素。随机森林结果显示肝脏疾病史、饮茶、饮酒和食用水果的MDG分别为42.31、28.63、26.99和21.43。2、经文化程度调整后-550H/L多态性的HL基因型与肝癌发病风险无统计学意义上的关联,但LL基因型与肝癌发病风险呈正相关关联(AOR=1.61,95%CI:1.00-2.57);携带-221 YX基因型和XX基因型人群的调整肝癌发病风险分别是携带YY人群的1.51倍(95%CI:1.03-2.21)和5.67倍(95%CI:1.82-17.67);未发现+4 P/Q基因型与肝癌发病风险有统计学意义上的关联;携带codon 54 Non B/B基因型和BB基因型人群的肝癌发病风险的AOR分别为1.48(95%CI:1.01-2.17)和3.99(95%CI:1.55-10.30);未发现codon 52 D基因型和codon 57 C基因型,符合亚洲人群的遗传特征;单体型分析结果显示厦门人群中最常见的单体型为LYB,在总样本的频率达到39.3%,其次为HYB,在总样本的频率为32.1%,位居单体型频率第三位的是HXB,在总样本的频率为12.5%。运用广义线性模型计算各单体型的肝癌发病风险,其中单体型HYB的肝癌发病风险为0.64(95%CI:0.49-0.85),单体型LXB的肝癌发病风险为2.75(95%CI:1.13-6.64)。3、采用合成的方法构建四种MBL2启动子,并通过p GL3-Basic载体转染到293T细胞中,观察不同启动子对下游荧光素酶转录的影响。方差分析结果显示,启动子HX的荧光值均数为5509.00,比启动子HY和LY低,但比启动子LX高,差异有统计学意义。4、运用PHASE构建50例未经治疗的慢性乙肝感染者的MBL2单体型,并且按照单体型分组进行比较分析乙肝病毒深度测序的数据。T检验结果显示在MBL单体型分组间Core区、X区、Hbs Ag区、Long S区、Middle S区的突变数量差异具有统计学意义。Mann-Whitney U检验结果显示A1499G在高MBL2组突变频率更高,而T1653、T1674、T1753、A1726T和G1764A的突变频率在中/低MBL2组更高;运用公式计算HBV基因组各区域的香农熵,比较发现中/低MBL2组的C区、X区的准种复杂程度比高MBL2组高,差异有统计学意义。[结论]1、乙肝病毒感染、工作场所被动吸烟、饮酒以及肝病史是肝癌的危险因素,而每天食用水果、饮茶是肝癌的保护因素。随机森林结果提示乙肝病毒感染和饮食习惯对肝癌发病具有主效应。在调查过程中发现具有不良生活习惯的研究对象比例较高,应开展健康宣教工作。2、MBL2基因的-550 H/L位点、-221Y/X位点及codon 54 Non B/B基因型与肝癌的发病风险密切相关。单体型分析显示HYB对肝癌有保护作用,而单体型LXB是肝癌的危险因素。另外厦门人群中HXB的比例达到12.5%,与国外人群有显著性差异,可能是厦门人群肝癌高发的遗传因素。3、双荧光素酶报告系统的结果显示,启动子HY的荧光素酶活性最高,LY次之,而启动子HX的荧光素酶活性比上述两种启动子低,但比LX高,差异有统计学意义。4、MBL2单体型可影响特定区域的突变数量、单碱基的突变频率以及C区、X区的准群复杂程度,继而影响乙肝的疾病进展和肝癌的发病风险。