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目的： 前期研究表明三七总皂苷对COPD模型大鼠有较好的疗效,且巨噬细胞中NO、细胞因子TGF-β1、MMP-9和TIMP-1的异常表达是导致COPD发生的关键因素。本实验在脂多糖(LPS)刺激RAW264.7巨噬细胞后,研究三七总皂苷对COPD形成的关键因子NO和TGF-β1、MMP-9、TIMP-1的分泌及m RNA表达的影响,探讨三七总皂苷抑制巨噬细胞细胞因子释放的分子机制,从细胞分子水平探讨三七总皂苷治疗COPD的可能作用机制,为临床应用奠定实验基础。方法： 1.用脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞,检测NO和细胞因子TGF-β1、MMP-9、TIMP-1的表达;2.采用MTT法检测不同浓度脂多糖(LPS)及不同浓度三七总皂苷药液对RAW264.7巨噬细胞活性的影响,明确最适给药浓度;3.将实验中的巨噬细胞分为:①正常对照组(巨噬细胞不加LPS、不给药);②模型组(巨噬细胞+LPS);③阳性对照组(巨噬细胞+LPS+地塞米松);④药物处理组(巨噬细胞+LPS+三七总皂苷),三七总皂苷的给药量分4浓度分别为10μg/m L、30μg/m L、100μg/m L、300μg/m L;4.用Griess法分别测定正常对照组、模型组、阳性对照组和药物处理组的NO释放量,Elisa法分别检测上述分组中巨噬细胞培养液中TGF-β1、MMP-9、TIMP-1的蛋白含量,实时荧光定量(PT-PCR)法分别检测上述分组中巨噬细胞TGF-β1、MMP-9、TIMP-1m RNA的相对表达以及分析MMP-9/TIMP-1的相对表达水平的比值。结果：1.1μg/m L LPS作用于RAW264.7巨噬细胞24小时后,经MTT检测发现细胞活力与对照组相比无明显差异(P>0.05);并且,三七总皂苷浓度在10~300μg/m L范围内进行细胞给药,细胞活力与对照组无明显差异(P>0.05),证明无细胞毒性,可选择该浓度范围内的三七总皂苷进行后续实验;然而900~2700μg/m L的三七总皂苷作用于巨噬细胞24小时后,细胞活性显著降低(P﹤0.01),出现细胞死亡,证明高浓度的三七总皂苷具有细胞毒性。2.1μg/m L LPS作用于RAW264.7巨噬细胞后24小时后,细胞培养液中NO含量与正常对照组比较显著增加(P﹤0.01);然而在药物处理组中发现,100μg/m L和300μg/m L的三七总皂苷均可显著抑制的NO的释放(P﹤0.01);3.1μg/m L LPS作用于RAW264.7巨噬细胞后24小时后,细胞培养液中TGF-β1蛋白和胞内的m RNA与正常对照组比较明显增加(P﹤0.05);在药物处理组中发现,100μg/m L和300μg/m L的三七总皂苷均可显著抑TGF-β1蛋白的表达(P﹤0.05);而100μg/m L的三七总皂苷对TGF-β1的m RNA表达有显著抑制作用(P﹤0.05);4.1μg/m L LPS作用于RAW264.7巨噬细胞后24小时后,MMP-9的m RNA、蛋白与正常对照组比较表达增加(P﹤0.01);而300μg/m L的三七总皂苷可显著抑制LPS诱导巨噬细胞MMP-9的m RNA和蛋白的合成(P﹤0.05,P﹤0.01);5.1μg/m L LPS作用于RAW264.7巨噬细胞后24小时后,TIMP-1的m RNA、蛋白与正常对照组比较表达升高(P﹤0.05,P﹤0.01);在药物处理组中,10~100μg/m L的三七总皂苷可显著抑制LPS诱导巨噬细胞TIMP-1的蛋白合成(P﹤0.05);而100~300μg/m L的三七总皂苷可显著抑制TIMP-1m RNA表达(P﹤0.01)。6.LPS刺激巨噬细胞后,MMP-9/TIMP-1的比值为1.88高于与正常对照组的1.57,相反,在药物处理组中300μg/m L三七总皂苷可降低MMP-9/TIMP-1的比值至1.51回复到正常对照组的水平。结论：1.发现与COPD的发病密切相关的NO和细胞因子TGF-β1、MMP-9及TIMP-1,在LPS刺激的巨噬细胞后表达显著升高;2.证实三七总皂苷可抑制NO的释放,下调TGF-β1、MMP-9、TIMP-1的蛋白及m RNA的表达,调节MMP-9/TIMP-1的相对含量(比值)到正常水平;3.进一步明确三七总皂苷对COPD的干预作用,是通过下调巨噬细胞的细胞因子TGF-β1和NO,调节MMP-9/TIMP-1相对表达来实现。