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目的通过母代高脂饮食（high-fatdiet,HFD）构建母代糖代谢异常模型,研究母代HFD对子代肠道菌群和ZO-1、Occludin蛋白表达的影响。并通过改变分娩方式（自然分娩或剖宫产）、哺乳方式（自行哺乳或交叉哺乳）,阻断母婴菌群传递,探究不良宫内环境,母婴传递对子代菌群及肠屏障功能的影响。方法1.建立跨代C57BL/6J小鼠模型,7周龄（week,w）C57BL/6J雌鼠120只,雄鼠40只,适应性喂养1w。随后将雌鼠随机分为高脂饮食组（high-fat diet group,HFD组,脂肪含量占60%,每克热量5.24 kcal）与正常饮食组（normal chow diet group,NCD组,脂肪含量占5.3%,每克热量3.90 kcal）,HFD干预8w后,对雌鼠行口服葡萄糖耐量试验（oral glucose tolerance test,OGTT）,验证高脂造模是否成功。造模成功后雌雄小鼠按照3:1的比例进行交配,将观察到阴栓之日记为妊娠第1天,孕期、哺乳期母鼠单笼饲养。为保证笼位间营养均衡,母鼠分娩后将每笼子鼠数量调整为5只。2.子代分组:第一步,研究自然分娩（vaginal delivery,VD）状态下母代HFD对子代影响,将子代分为NC/VD/NC组（正常饮食母鼠/自然分娩/正常母乳组子代）、HF/VD/HF组（高脂饮食母鼠/自然分娩/高脂母乳组子代）。第二步,通过剖宫产（cesarean section,CS）,阻断阴道菌群传递,研究分娩方式改变对子代影响,将子代分为NC/CS/NC组（正常饮食母鼠/剖宫产/正常母乳组子代）、HF/CS/HF组（高脂饮食母鼠/剖宫产/高脂母乳组子代）。第三步,通过交叉哺乳,阻断哺乳菌群传递,研究哺乳方式改变对子代影响,将子代分为NC/VD/HF组（正常饮食母鼠/自然分娩/高脂母乳组子代）、HF/VD/NC组（高脂饮食母鼠/自然分娩/正常母乳子代）。第四步,研究分娩和哺乳方式同时改变对子代影响,将子代分为NC/CS/HF组（正常饮食母鼠/剖宫产/高脂母乳组子代）、HF/CS/NC组（高脂饮食母鼠/剖宫产/正常母乳组子代）。各组子代雌雄各取10只,子代3w时断乳,正常膳食喂养至8w。3.每周对母鼠及子鼠称重,并记录进食进水量。子代4w及8w行OGTT。4.子代4w、8w粪便采集及肠道菌群16s rRNA基因V3-V4区测序分析:将采集好的粪便放入已贴好相应子鼠编号和时间点2ml灭菌冻存管后,立即将冻存管放入液氮中速冻。粪便采集后行肠道菌群α-多样性分析。5.对8w子代结肠行免疫组化,检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达结果1.母代HFD造成自身体重增加（P<0.05）,OGTT各时间点血糖值明显高于 NCD 组（P<0.05）2.母代HFD对子代的影响:HF/VD/HF组子代出生时体重低于NC/VD/NC组,断乳后,体重明显高于NC/VD/NC组。4w及8w子鼠中,肠道菌群的丰富度以及多样性没有显著差异（P>0.05）。在4w雄性子鼠中,OGTT结果显示,HF/VD/HF组第120min血糖浓度高于NC/VD/NC组（P<0.05）。免疫组化结果显示,8w雄性子鼠中,HF/VD/HF组子代的结肠紧密连接蛋白ZO-1低于NC/VD/NC组（P<0.05）。3.分娩方式（VD/CS）改变对子代影响:断乳前,两组体重无明显差异,断乳后,NC/CS/NC组子代体重高于NC/VD/NC组。OGTT结果显示,与HF/VD/HF组相比,HF/CS/HF组子代糖耐量有所降低（P<0.05）。在8W子鼠中,HF/CS/HF组的菌群丰富度和多样性显著高于HF/VD/HF组（P<0.05）。4.哺乳方式（自行哺乳/交叉哺乳）改变对子代影响:与VD组相比,NC/VD/HF组子代体重较重,HF/VD/NC组子代体重较轻（P<0.05）。OGTT结果显示,与VD组相比,NC/VD/HF组子代糖耐量升高,HF/VD/NC组子代糖耐量较低（P<0.05）。在4w雌性子鼠中,NC/VD/HF组子代肠道菌群的丰富度明显低于NC/VD/NC组（P<0.05）。此外,HF/VD/NC组子代肠道菌群的丰富度显著高于NC/VD/HF 组（P<0.05）,而在 8w 时,NC/VD/NC 组、NC/VD/HF 组、HF/VD/HF组、HF/VD/NC四组小鼠的肠道菌群丰富度趋于一致。免疫组化结果显示,交叉哺乳子代结肠紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达量低于自然分娩组（P<0.05）。5.分娩加哺乳方式同时改变对子代的影响:与VD组相比,NC/CS/HF组子代体重较高,HF/CS/NC组子代体重明显降低（P<0.05）。OGTT结果显示,与VD组相比,NC/CS/HF组子代糖耐量升高,HF/CS/NC组子代糖耐量降低（P<0.05）。生产和哺乳方式同时改变使得子代的肠道菌群丰富度升高,并显著高于HFD 组（P<0.05）。结论1.母代HFD引起子代糖耐量异常,破坏子代肠屏障的完整性,使肠道通透性（intestinal permeability,IP）增加。2.分娩方式改变显著影响肠道菌群的丰富度和多样性。CS阻断不良宫内环境组阴道有害菌向子代的传递,改善子代糖耐量,阻断正常宫内环境组阴道有益菌向子代的传递,可能影响子代健康。3.哺乳方式改变显著影响子代肠道菌群的丰富度。交叉哺乳促使不良宫内环境组乳汁有益菌向子代传递,改善子代糖耐量,促使正常宫内环境组乳汁有害菌向子代传递,可能影响子代健康。4.分娩与哺乳方式同时改变更加显著改变子代肠道菌群丰富度。该方法阻断不良宫内环境组阴道有害菌群,促使乳汁有益菌向子代传递,改善子代糖耐量。阻断正常宫内环境组阴道有益菌,促使乳汁有害菌向子代传递,可能影响子代健康。