目的：“丽安康”为“当归补血汤”的衍生方,已有细胞生物学实验研究证明该衍生方具有雌激素样作用和促进成骨细胞增殖和分化作用,从而在微观层面上为该方治疗围绝经期骨质疏松症提供了确切的实验依据。但目前对该方的研究尚缺乏有效成分的控制和整体动物药效的验证,所以本课题进行药学研究和药效毒理研究,并结合前期的细胞研究结果和药理研究结果阐述其整体动物疗效的作用机理,为本方治疗围绝经期骨质疏松症提供宏观水平的应用依据。方法和结果：1.丽安康的提取工艺研究根据前期的细胞实验结果和药材特性,本研究以相应的有效成分为考察指标,运用4因素3水平的正交试验对提取工艺进行优化研究。其中,黄芪、当归共煎工艺研究以黄芪甲苷和总固物为考察指标,选取加水量、提取时间、提取次数、干燥温度等4个因素进行考察,最终确定“当归、黄芪加8倍量水煎煮3次,每次1.5小时,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.35-1.40(60℃),70℃下减压干燥”为最佳共煎工艺；淫羊藿醇提工艺以淫羊藿苷和总固物为考察指标,选取乙醇浓度、乙醇量、提取时间、提取次数等4个因素考察,最终确定“淫羊藿加14倍量70%乙醇提取2次,每次1小时,滤过,滤液合并,减压回收乙醇,减压浓缩成相对密度为1.20(50℃)的清膏”为最佳醇提工艺。在确定最佳提取工艺的基础上,本研究对制剂成型工艺进行了探索。由于方中提取物含有大量多糖,容易导致制剂粘性大、易吸潮,为满足制剂要求和保证用药效果,本研究从崩解时间、吸湿百分率、休止角、临界相对湿度等方面考察制剂成型方案。最终确定方案为,各干膏粉与适量微晶纤维素、羧甲基淀粉钠等辅料,混匀,以处方量4.2%交联聚维酮为崩解剂制备颗粒,低温干燥(55℃)后,颗粒与2.3%微晶纤维素为润滑剂混合,压片,包衣,即得。所得制剂崩解时限(26min)、临界湿度(64%)适中。2.丽安康的有效成分含量测定方法研究本研究建立了柱前衍生-HPLC法测定方中黄芪甲苷的含量,即以吡啶-苯甲酰氯(2.5：1)为衍生化试剂,对黄芪甲苷进行苯甲酰化；在Phenomenex Gemin C18色谱柱(50 mm×4.6 mm,5μm)上以乙腈-0.1%三乙胺溶液(98：2)洗脱30 min在230 nm检测样品中黄芪甲苷的含量。相比于HPLC-ELSD法,该法样品前处理更简单,专属性更强、准确度和灵敏度更高、重现性更好。同时本研究建立了对方中阿魏酸和淫羊藿苷含量的HPLC同步测定方法,即采用Phenomenex Luna C18柱(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.1%醋酸溶液作为流动相进行梯度洗脱,检测波长为316 nm,流速为1.0mL-min-1;该法准确、快速、灵敏、重复性好。实验结果表明,制剂中黄芪甲苷的含量为0.38mg/片、淫羊藿苷为2.02mg/片、阿魏酸为0.017 mg/片。3.丽安康的药理研究本研究以整体动物为研究对象,建立自然衰老模型和去势模型的对照研究模式,从骨形态指标、外周血内分泌物指标、下丘脑神经递质指标、免疫指标、脏器指标等进行研究骨质疏松症的药理作用研究。药理作用结果表明：在骨形态方面,丽安康可减缓两个模型大鼠的骨质疏松和骨小梁结构退化症状。在外周血内分泌物方面：丽安康提取物对两个模型大鼠均具有调节大鼠β-内啡肽的分泌以及性激素水平、提高大鼠血清SOD水平同时降低MDA水平的作用；但仅本方对衰老模型具有显著下调FSH/LH的比值的作用。在下丘脑神经递质方面,丽安康抑制去势模型中大鼠下丘脑单胺递质NE及5-HT水平的上升,而在自然衰老动物模型中,本方能抑制自然衰老大鼠下丘脑单胺递质NE. DA、5-HT水平的下降。在免疫方面,丽安康提取物可减缓自然衰老大鼠T-淋巴细胞亚群CD4/CD8比值下降,提高该模型大鼠的细胞免疫功能；对于去势动物模型则无影响。在相关脏器指标方面,本方可改善因切除卵巢引起的大鼠子宫内膜萎缩、阴道黏膜萎缩等退变;可改善因自然衰老引起的大鼠子宫、阴道、卵巢萎缩等退变。4.丽安康的辅助药理研究围绝经期妇女容易出现免疫力下降和记忆力减退、潮热等症状,不但影响患者生活质量,而且严重影响药物的疗效。鉴于此,本研究通过研究本复方对免疫抑制模型、记忆障碍模型、发汗动物模型的药理作用,阐述其对主症的辅助治疗作用。结果如下：①.可提高醋酸泼尼松致免疫抑制小鼠的体液免疫功能；②.可提高醋酸泼尼松致免疫抑制小鼠的特异性细胞免疫功能；③.可提高醋酸泼尼松致免疫抑制小鼠的巨噬细胞吞噬功能；④.可提高醋酸泼尼松致免疫抑制小鼠的胸腺指数及脾指数；⑤.对记忆形成、巩固、再现障碍模型小鼠记忆功能均有一定的改善作用；⑥.可缓解注射毛果芸香碱溶液致发汗小鼠的发汗程度。5.丽安康的毒理研究根据丽安康的药效作用,特别针对内分泌功能调节相关的的靶器官(卵巢、子宫等生殖系统),进行相关的毒理研究。结果显示,各用药组和对照组动物无一死亡外观体征无异常改变,行为活动正常；进食量、饮水量、体重增长和粪便性状等与对照组比较,均无异常改变。子宫、卵巢的组织结构及细胞形态在用药的高剂量组与不用药的对照组之间比较无明显差别。结论：由上述实验结果可知,丽安康剂制备工艺完善,各种工艺参数均说明该方剂的提取和成型中指标成分转移率符合要求,工艺中各种影响因素的规律明确并且量化可控。指标成分的检测方法准确、重复性良好,保证成品的质量可控,从而最大限度地保留细胞活性实验所证实的相关活性成分,并为药理实验验证细胞实验结果提供保证。药理实验结果表明,具有治疗围绝经期骨质疏松症的药理学基础,验证该方在细胞实验中具有的雌激素样作用和直接促进成骨细胞生长的药理作用；根据5类指标结果和细胞研究结果可知,本方具有两方面作用,第一,直接作用于骨骼组织,缓解骨密度下降。第二,通过对靶器官的改善,促进卵巢分泌雌激素,并调节下丘脑-垂体-卵巢轴的作用,改善造成骨质疏松症的体内环境。毒理研究结果表明,而且本方的相关器官具有较高的安全性。本研究围绕着该方的指标成分的提取和检测、相关器官的药理作用和毒理作用进行深入研究,其结果表明该方能够体现中医药治疗该疾病的优势并阐明药理作用,为丽安康的治疗围绝经期骨质疏松症的临床运用提供实验研究基础。