目的越来越多的流行病学调查研究表明,随着肥胖患病率的日益提高,其所引起的社会负担,除了已经证实的相关疾病如高脂血症,胰岛素抵抗,糖尿病,心血管疾病等之外,还和许多肿瘤的患病率有明显相关性。这使得肥胖的社会危害大增,甚至有研究表明其危害作用已经超过了烟草滥用。目前,随着流行病学研究的深入,肥胖和肿瘤的关系也进一步明确,探索肥胖与肿瘤发病机制的研究就成为目前研究的焦点。但是目前对于肥胖是如何增加肿瘤易感性或者说肥胖如何增加了致癌性还并不清楚。其中脂代谢的异常可能是肥胖导致肿瘤易感的原因之一,一项关于单酰基脂肪酶(MAGL)的研究为此提供了重要的证据。单酰基甘油脂肪酶,主要作用于脂肪的分解代谢,将单酰基甘油水解并产生游离脂酸。研究表明MAGL在肿瘤的进展中起到重要调节作用,同时MAGL被敲低后,肿瘤的生长明显被抑制。根据MAGL在正常胃肠道中均有表达的特点,本实验旨在探索MAGL在大肠癌中的表达以及其对肿瘤细胞生长的影响,同时为肥胖与大肠癌的关系寻找新的突破点。方法本研究通过免疫组化,RT-PCR法检测MAGL在大肠癌组织中的表达,分别对其进行定性和定量分析,比较患者病理特征与MAGL表达的关系。然后,我们分别使用siRNA和JZL184分别从转录水平和蛋白水平抑制MAGL的表达,通过MTT检测细胞活性,transwell检测细胞侵袭性,流式细胞计数分析细胞周期,BrdU检测细胞增殖,末端转移酶标记法检测细胞凋亡等方法来评价MAGL敲低后对肿瘤细胞生长的影响。随后,为了进一步探索MAGL在肿瘤细胞中作用的机制,我们通过RT-PCR对大肠癌细胞中部分增殖和凋亡的相关基因(cyclin D1, bcl-2, Mcl-1, cyclin E)进行筛查。最后,建立大肠癌裸鼠移植瘤模型,通过比较MAGL敲低后与未敲低的肿瘤细胞的致瘤性,以及JZL184对移植瘤生长的影响,来判断MAGL敲低后对活体肿瘤的影响。结果我们发现MAGL的表达在肿瘤组织中明显升高(1.87±0.62),远高于正常组织的(1.04±0.62)(P<0.05),同时在患者的病理资料与MAGL表达中,我们发现仅有BMI指数与MAGL的表达有一定相关性(P<0.05),而其它并无明显相关性(P>0.05)。进一步的研究表明,MAGL敲低后,肿瘤细胞的生长受到明显抑制,如LOVO细胞中,通过JZL184作用后,细胞的增值率仅为25.1%,明显低于对照组209.5%(P<0.05),凋亡率较对照组增加了7.8倍(P<0.05)；而通过siRNA的作用后,细胞的增值率仅为28.5%,亦明显低于对照组的209.5%(P<0.05),凋亡率较对照组增加了6.1倍(P<0.05)(其他结果详见正文部分)。随后,通过对部分细胞增殖与凋亡的相关基因的筛查,我们发现,bcl-2和cyclin D1的表达明显减低,其中在转录水平,cyclin D1在LOVO, Caco-2和SW480中分别减低50.5%,78.8%和64.5%,而bcl-2分别减少65.4%,73.7%和51.6%(蛋白水平减少详见正文)。最后在移植瘤模型中,我们发现,MAGL敲低后肿瘤细胞Caco-2成瘤性明显下降,1月后肿瘤体积缩小400mm3,成瘤体积明显小于对照组(P<0.05)。而成瘤后给予JZL184口服14天后,肿瘤体积也明显缩小约300mm3(P<0.05)。结论本实验表明MAGL敲低后在体内和体外均对大肠癌细胞的生长有明显的抑制作用,对肿瘤细胞的活性,侵袭性及细胞周期都有明显的抑制,同时,cyclin D1和bcl-2的表达也随着MAGL敲低而减低,这为大肠癌的治疗提供了新的靶点。同时,本实验表明MAGL的表达与患者BMI指数有相关性,又无疑为肥胖和肿瘤的关系提供了一个新的证据。虽然本实验表明MAGL表达与其他肿瘤病理学特征无明显相关性,但是MAGL在大肠癌中的研究尚在襁褓之中,甚至对于MAGL对大肠癌细胞的调节作用机制并不清楚,所以其在肿瘤中作用还需要进一步深入的研究。