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目的前列腺癌是世界上男性最常见的泌尿生殖系统肿瘤之一,其发病率和死亡率正逐年呈递增趋势。前期的研究发现泛素化-蛋白酶体途径在肿瘤中发挥着重要作用,本文主要通过生物信息学及相关的实验研究来分析26S蛋白酶体亚基PSMA5及蛋白酶体抑制剂在前列腺癌发生发展中的作用机制,为前列腺癌有效的靶向诊疗和相关的药物联合治疗提供科学依据。方法1.通过生物信息学技术方法对26S蛋白酶体α5亚基进行分析,利用TCGA数据库对PSMA5基因的mRNA的表达水平进行差异分析,使用cBioportal网站分析PSMA5在不同Gleason评分分级的前列腺癌和在淋巴转移性前列腺癌中的表达情况,最后利用GEPIA网站预测PSMA5的表达与前列腺癌患者临床预后之间存在的联系,为临床试验研究提供依据。2.收集相同时期的前列腺癌和前列腺增生组织标本,对组织进行免疫组织化学染色(IHC)和蛋白质印记法(western blot)验证PSMA5在不同组织中的表达水平差异。进一步通过体外培养前列腺癌细胞系(PC3、LnCap、DU145、C4-2)和正常的前列腺上皮细胞(RWPE-1),提取细胞蛋白和RNA,通过蛋白质印记法(western blot)和实时聚合酶链反应技术(RT-qPCR)检测PSMA5在前列腺癌细胞和正常前列腺上皮细胞中的表达差异情况。3.体外培养高表达PSMA5的前列腺癌细胞系(PC3、C4-2),通过siRNA抑制细胞中的PSMA5的表达水平,与对照组比较来观察前列腺癌细胞的表观遗传学行为的改变情况,相应的表观遗传学包括细胞增殖(CCK-8、MTT、单克隆实验)、迁移侵袭能力(划痕实验、Transwell)及凋亡水平(流式细胞仪)。4.使用蛋白酶体抑制剂硼替佐米来处理PC3细胞,通过药物浓度梯度法测定硼替佐米的细胞半数致死量IC50浓度,再进一步比较硼替佐米,PSMA5抑制及其联合使用对PC3的增殖能力和凋亡水平影响,观察硼替佐米和PSMA5靶向抑制是否有协同作用。5.通过对PC3细胞长期的硼替佐米药物刺激,培养出对硼替佐米耐药的细胞株(PC3-R),检测耐药株中的PSMA5的表达水平的变化情况,通过抑制PC3-R细胞中的PSMA5的表达来观察细胞对硼替佐米敏感性的恢复情况,从而寻找出硼替佐米在前列腺癌中产生耐药性的可能机制。结果1.通过TCGA数据库分析发现,相对于正常的前列腺组织,PSMA5在前列腺癌组织中表达显著升高(P<0.001)。同时,PSMA5的表达与前列腺癌的Gleason评分显著相关(P=0.027),在有淋巴结转移的前列腺癌中,PSMA5的表达水平显著升高(P<0.001)。在临床预后中,PSMA5的表达量与无疾病生存期显著相关(P=0.048),与总生存期无关(P>0.05)。2.组织中的免疫组化和western blot结果显示,前列腺癌的PSMA5的表达量较前列腺增生组织增加(P<0.05),同时前列腺癌细胞中的PSMA5表达相对于正常前列腺上皮细胞显著升高(P<0.05),以PC3和C4-2细胞表达量最高。3.抑制PC3和C4-2细胞中的PSMA5后,发现与对照组相比,PC3、C4-2实验组的增殖、迁移侵袭能力减弱,细胞凋亡增加,同时,上皮间质转化能力(EMT)减弱。4.与硼替佐米和PSMA5抑制组相比,硼替佐米联合PSMA5抑制能够显著抑制PC3细胞的增殖和增加PC3细胞的凋亡,说明两者在治疗前列腺癌方面具有协同作用。5.在硼替佐米耐药细胞中,PSMA5的表达相对增加,在PC3-R细胞中抑制PSMA5的表达后,PC3-R细胞恢复了对硼替佐米的敏感性。结论前列腺癌中PSMA5的表达增加并与临床肿瘤分级及预后相关,靶向抑制PSMA5后前列腺癌的肿瘤进展得到了抑制。同时,PSMA5与蛋白酶体抑制剂能够协同作用于前列腺癌的治疗并且在硼替佐米肿瘤耐药中发挥着重要的作用。因此,PSMA5可以作为未来控制前列腺癌进展的重要治疗靶点。