论文部分内容阅读
目的：建立缺氧/复氧模型，检测缺氧/复氧后内皮细胞中PBEF (pre-B-cellcolony-enhancing factor，前B细胞克隆增强因子)的蛋白表达变化，通过RNA干扰沉默PBEF基因探讨PBEF与VEGF (Vascular endothelial growth factor,血管内皮细胞生长因子)和（Phosphorylation-myosin light chain kinase，磷酸化的肌球蛋白轻链）的关系，研究PBEF在缺氧/复氧后内皮细胞通透性增加的机制。方法：1、根据文献合成PBEFsiRNA, HUVEC根据处理的不同分为空脂质体对照组、阴性对照组和PBEFsiRNA组，通过RT-PCR和western blot分别在基因水平和蛋白水平检测PBEF的表达情况。2、建立内皮细胞缺氧/复氧模型，根据对HUVEC处理的不同将实验分为正常对照组、缺氧（20小时）/复氧（3小时）组、缺氧（20小时）/复氧（6小时）组、缺氧（20小时）/复氧（9小时）组、缺氧（20小时）/复氧（12小时）；Westernblot检测PBEF的蛋白表达情况。3、根据对HUVEC处理的不同将实验分为：Ⅰ组(缺氧/复氧+空脂质体对照组），Ⅱ组(缺氧/复氧+阴性对照组），Ⅲ组(缺氧/复氧+PBEFsiRNA组）、Ⅳ组(空脂质体对照组），western blot检测VEGF和p-MLC的表达情况。结果：1、PBEFsiRNA干扰PBEF的mRNA和蛋白表达水平与脂质体对照、阴性对照相比明显下调(P﹤0.05)；阴性对照组和脂质体对照组之间差别无统计学意义(P>0.05)。2、与正常对照组相比缺氧/复氧组PBEF蛋白表达明显增加，复氧3h开始升高，9h达峰值，持续到12h后开始下降。(P<0.05)3、对HUVEC进行缺氧/复氧和RNA干扰后，Ⅰ组和Ⅱ组与Ⅳ组相比VEGF、p-MLC表达明显升高(P﹤0.05)；Ⅲ组与Ⅰ组和Ⅱ组相比VEGF、p-MLC表达明显下降(P﹤0.05);Ⅰ组与Ⅱ组间无明显差异(P﹥0.05)。结论：1、内皮细胞缺氧/复氧后PBEF、VEGF和p-MLC表达都明显增高。2、沉默PBEF后，缺氧复氧所导致VEGF的表达显著降低，表明PBEF可能通过调控VEGF的表达改变内皮细胞通透性。3、沉默PBEF后，缺氧复氧所导致p-MLC的表达显著降低，表明PBEF可能通过调控MLC磷酸化在细胞骨架改变方面起作用。