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前言 心肌缺血-再灌注损伤的机制较为复杂，已有研究表明：兔、鼠和人类的心肌细胞在经过一定时间的缺血-再灌注后可出现明显的细胞凋亡。c-fos基因参与了心肌缺血-再灌注损伤，在心肌缺血早期即有缺血区c-fos基因的表达，缺血时间越长表达越多。艾司洛尔是选择性β受体阻断剂，临床研究证明其可降低心肌氧和能量的消耗，存在心肌保护作用，临床通过对冠状动脉手术的患者研究发现：冠状动脉含艾司洛尔温血液灌注可避免心肌缺血，减少心肌水肿，从功能和结构上产生心肌保护作用，这一技术优于原标准晶体停跳液。本研究采用离体大鼠心肌缺血-再灌注模型，从细胞超微结构及免疫组化角度观察心肌缺血-再灌注后心肌凋亡的发生、c-fos基因的表达以及艾司洛尔对其的影响。 材料与方法 Wistar大鼠40只，随机分为5组，每组8只。正常对照组（N组）用不含任何药液的Kerbs-Henseleit（K-H）液预灌15min，再继续灌注80min；缺血-再灌注对照组（C组）预灌15min，再续灌20min，心脏停跳全心缺血30min后，再灌注30min；其余3组分别为高（EH组）、中（EM组）、低（EL组）浓度艾司洛尔灌注组(艾司洛尔浓度分别为100μg·ml-1、20μg·ml-1、4μg·ml-1)，用不含任何药液的Kerbs-Henseleit（K-H）液预灌15min后，于缺血前用含三种浓度艾司洛尔的K-H液继续灌注20min，后续步骤同C组。 3％戊巴比妥钠（30＊g·kg’‘）、肝素（500 U·kg’‘）腹腔注射，麻醉后无菌条件下摘取心脏，于冰盐水”℃－4℃)内迅速行主动脉插管，并与 ogCndoffe灌注装置连接，温度控制在 37。0．Zt，灌注压 90crnHp，门 对一0．098 kPa)并于灌注过程中持续通人95％OZ和 5％COZ混合气，各组灌注完成后留取左室前壁心肌标本。采用免疫组化SP法，用相应的C加抗体检测心肌细胞中C巾S基因表达免疫反应强度。用计算机成像分析系统分析C－fos基因表达情况，得出ch 蛋白阳性表达的相对面积（Protein沈presslon relative删a of c－fos gene PE他），同时于透射电镜下观察，0肌细胞超微结构变化。 所得数据以均值。标准差k。s)表示，采用 Excel行组间数据团体T检验。P＜O．05为有统计学差异。 结 果 1．大鼠心肌超微结构的变化 透射电镜下见J组心肌细胞形态基本正常人组形成凋亡小体，EHSMsL组出现凋亡早期表现。 2、大鼠心肌细胞C心S蛋白表达 C中 蛋白阳性染色部位主要为胞浆，阳性细胞可见细胞浆内出现棕黄色颗粒。N组心肌细胞内未见C如S蛋白阳性标记或少量标记人组及EH上M下L组胞浆中棕黄色颗粒明显增多人组与EH、EM＊L组相比表达更强。与N组相比，C、EH、EM＊L组C人 基因表达水平明显提高河＜0．of人与 C组相比 EH上M在L组 C心 基因表达水平明显降低(P＜0．of人 EM组 C七 基因表达水平较 EH组高门＜0．05人士L组 C血S基因表达水平较 EH组高（P＜0．05人士L组与 EM组 C也 基因表达水平无差异（P＞0．05）。 ·2· 讨 论 1．细胞在生命过程中存在着两种不同的死亡现象：一种是坏死，另一种是凋亡，已有多项研究表明，鼠、兔和人类的心肌细胞在经过一定时间的缺血缺氧或缺血一再灌注后，可出现明显的凋亡现象。我们采用了离体大鼠心肌缺血及再灌注损伤模型，从细胞超微结构观察心肌在缺血与再灌注后细胞凋亡发生及文司洛尔对其影响。艾司洛尔三组出现凋亡早期表现，细胞器损伤较缺血一再灌注对照组轻，可为其保护作用所致。 2、细胞凋亡基因表达具有复杂的分子调控机制，许多基因都参与凋亡的发生。按其表达产物对凋亡过程的影响，将凋亡相关基因分为凋亡促进基因门c－mrc、P53人ax＊CE／des等）和凋亡抑制基因(如 b＊－2人一XI等人我们选择了 C－fos原癌基因在大鼠离体全心缺血一再灌注损伤模型中的表达情况，并探讨了艾司洛尔对其表达的影响。C太原癌基因属于即刻早期基因家族，耦联细胞外信息与细胞内靶基因的转录，被称为核内“第三信使”，调控细胞凋亡过程。C和基因存在于正常心肌、血管平滑肌和内皮细胞中，参与正常细胞的生长发育，它既是心血管系统发育所必须的基因，也是心血管系统应激反应所必需的基因。业已证明，在心肌缺血早期即有缺血区C心 基因的表达。缺血时间越长ChSInRNA表达越多。近年来的研究表明，C个基因参与心肌缺血一再灌注损伤。 对鼠、兔、猪的在体和离体试验发现：同高钾溶液一样艾司洛尔可作为一种有效的心脏停跳液，创造出可控的、可恢复的常温心脏停搏手术条件／ 床通过对冠状动脉手术的患者研究发现：冠状动脉合艾司洛尔温血液灌注可避免心肌缺血，减少心肌水肿，完全保留了心肌的性能，无论从功能还是在结构产生心肌保护作用， ·3· 这一技术优于原标准晶体停跳液。 本研究应用免疫组化SP法显示C和 蛋白表达，结果显示缺 血一再灌?